2024年3月28日发(作者：魅蓝note2上市时间)
安徽医科大学学报
Acta
Universitatis
Medicinalis
Anhui
2021
May
；
56(
5
)
・
671
・
网络出版时间
：
2021
-4-217
：
1
6
网络出版地址
：
https
:
//kns
.
cnki.
net/kcms/
detail/34.
1065.
R.
20210402.
1339.
002.
html
◊
基础医学研究
^
小檗碱调节
ERK/NF-
k
B
信号通路
改善高糖诱导的系膜细胞异常增殖
胡亚琴
0
汪佳佳
0
吴
昊
1
2
，
刘
青
0
唐丽琴
02
,
魏
伟
1
*
摘要
目的
探讨小檗碱
（BBR
）
对高糖
（
HG
）
诱导的系膜
膜增厚⑵
,
MCs
的异常增殖是导致肾小球系膜基质
增加和细胞外基质
（
extracellulannat/a
,
E
C
M
）
沉积
细胞
（
MCs）
异常增殖的调节作用及可能的机制
。
方法
体
外培养
MC/
实验分为对照
、
高糖模型和
BBR
给药组
（
30
、
60,90
|±mo/L
）
；
CCK-8
法检测细胞增殖活力
；
高内涵系统成
像法检测细胞的增殖能力;激光共聚焦法检测细胞外基质沉
积蛋白
（
ECM
）
W
型胶原蛋白
（
Col-IV
）
9
纤维连接蛋白（
FN
）
表达情况
;
Western
blot
法检测细胞上细胞外信号调节激
酶
（
ERK
）
、
p-ERK
、
磷酸化促分裂原激活激酶
1
（
p-MSK1
）
、
I
k
B
、
p
-8
k
B
、
p
65
、
p
-
p
65
的蛋白表达情况
。
结果
CCK-8
法结
果显示
,BBR（
30
、
60
、
90
|±mol/L
）
均可抑制
MCs
的增殖活力
；
高内涵系统成像结果显示
，
BBR
（
30
、
60
、
90
pno//
）
可抑制
HG
诱导的
MC/
的异常增殖;激光共聚焦实验结果显示,
BBR（
90
pmol/L
）
能降低
ECM
上的
的表达水平
；
Western
blot
实验结果显示
，
BBR
（
30
、
60
、
9
0
pmo/L
）
能降低
MC/
上
p-ERK
、
p-MSK1
、
pEKB
、
p-p65
蛋白的表达水平
。
结论
BBR
可能调节
MCs
上的
ERK/NF-
p
B
的信号通路
，
改善
HG
诱导的
MCs
异常增殖。
关键词
小檗碱;糖尿病肾病;系膜细胞
;
细胞外调节蛋白激
酶;核转录因子
k
B
中图分类号
R
067
文献标志码
A
文章编号
1000
-1492
（
2021
）
05
-0671
-05
doi
：
10.
19405//
cnki.
iss/1000
-
1022.
0021.05.
001
糖尿病肾病
（
diabetic
nephropathy
；
DN
）
被认为
是造成终末期肾脏功能衰竭的主要原因之一⑴
。
DN
的主要病理变化是肾小球系膜细胞
（
mpygia
cells
,
MCs
）
异常增殖
，
肾小球系膜基质扩张和基底
2020
-11
-07
接收
基金项目
：
国家自然科学基金
（编号
：
8177705
/
）
作者单位
：
安徽医科大学临床药理研究所
、
抗炎免疫药物教育部重
点实验室
、
抗炎免疫药物安徽省协同创新中心
，
合肥
230230
2
中国科学技术大学附属第一医院
（安徽省立医院
）
药剂
科
，
合肥
230023
作者简介:胡亚琴
，
女
，
硕士生
；
唐丽琴
，
女
，
博士
，
主任药师
,
教授
,
博士生导师
，
责任作者
,
:
mngliqin@
ustc.
elu.
cn
；
魏
伟
，
男
，
博士
，
教授
，
博士生导师
，责任作者
,E-maii
：
wwei@
at
mu.
elu.
cn
增加的重要原因
，
而
V
型胶原蛋白
（
collagee
V
,
Col-V
）
和纤维连接蛋白
（
fiCapptia
,
FN
）
是
ECM
的主要成分
[4]
0
研究⑷表明
，
细胞外信号调节激酶
（
extracellulaa
siqnai
-
repulateP
Cinass
,
ERK
）
在调节
细胞的增殖
、
分化过程中具有重要作用
。
促分裂原
激活激酶
1
（
mitopestass
activatee
Cinass
1
,
MSK1
）
是
ERK
的下游激酶
，
可诱导核转录因子
Cdppa
B
（
nacleer
factor
Caapa
B
,
NF-pB
）
的激活
A
7
。
小檗
碱
5„1
,
BBR
）
具有抗氧化活性
、
调节血脂和
减轻炎症等多种药理作用
。
课题组前期研究⑺表
明,
BBR
可能在抑制肾小球
MCs
的增殖和分泌中起
重要作用
。
该研究通过探讨
BBR
能否调节
ERIK
NF-
p
B
信号通路改善高糖诱导的
MCs
的异常增殖,
进一步研究
BBR
对
DN
的药理作用机制
。
1
材料与方法
1.1
材料
1.1.
1
细胞
小鼠
MCs
株
（
147589
）
购自中科院上
海细胞库
。
1.1.0
药物
BBR
（
BW
50137
）
购自北京北纳创联
生物技术研究所,纯度为
99
37%
（
液相色谱法
）
。
配置方法
：
称量
BBR
粉末
20.
182
5
g,
加入
8
mi
生
理盐水
,
并通过加热和超声处理使其完全溶解
,
得到
终浓度为
1.3X10
4
*
pmo/L
的
BBR
母液
，
采用
0.
22
pm
无菌滤器除去细菌后
-22
七
存放
。
使用前水浴
加热
,
使其溶解后
,
稀释数倍至所需浓度即可
。
1.1.
3
试剂
CCK-8
试剂盒购自日本同仁化学研
究所
;
DMEM
培养液购自美国
Hyc/ne
公司
；
胎牛血
清购自以色列
Biolopicel
Industries
公司
；
青霉素-链
霉素溶液
、
胰酶
、
一抗稀释液
、
二抗稀释液,
DAPI
染
液及防荧光淬灭剂购自上海碧云天生物技术研究
所;
7
孔细胞培养板购自无锡
NEST
公司
；
鼠源
FN
购自武汉
ProteintecC
公司
；
兔源
Col-V
购自英国
Ab-
cem
公司
；
兔源
ERK
、
p-ERK
购自美国
affinity
公司
；
-672
-
安徽医科大学学报
Ada
Unwersitatis
Medicinalis
Anhui
2021
May
；
56(5
)
Ir 、 p-lKB 、 p65 、 p-p65 购自美国 Cell Signaling Tech 次 5 min, 弃去 PBS; 5 % BSA 室温下封闭 32 min 后, PBS 清洗细胞 3 遍 ， 每次 5 min, 弃去 PBS ; 一抗 （ nology 公司 。 1-1.4 仪器 电泳仪购自北京六一仪器厂 ;SW-CJ- 1F 超净工作台购自苏州苏净集团安泰公司 ； BioTek : 100 ） 4 C 过夜 ； 回收一抗后 ， PBS 清洗细胞 3 遍, 每次 5 min, 弃去 PBS ； 加入荧光二抗 200 p, 室温下 避光孵育 1 h 后 ， PBS 清洗 3 遍 ， 每次 10 min, 弃去 PBS ； 加入 DAPI 染液 220 p 染核 10 min 后 ， PBS 清 EO x808 酶标仪购自美国 BioTek 公司;激光共聚焦 显微镜购自德国莱卡公司 ； Image Xpress Micro 4 型 高内涵细胞成像系统购自美国 Molecrlae Devcics 公 司 ； ImayeQuaat LAS 4408 荧光及化学发光成像系统 洗细胞 3 遍 ， 每次 10 min, 弃去 PBS; 将盖玻片放置 平面上 ， 待其干后 , 将防荧光淬灭剂滴在载玻片上进 行封片 ， 盖玻片四周涂上指甲油用来密封 。 使用激 购自美国 GE Healthcrre Life Scieeces 公司 。 1. 1 细胞培养 从液氮中取出冻存细胞 ， 在 32 七 光共聚焦显微镜对细胞观察拍照 。 水浴中解冻并离心 ， 使用含有 10% FBS 和 1% 双抗 的 DMEM 低糖完全培养基培养细胞 ， 在 5% C0 1 和 22 °C 的培养箱培养细胞 。 1. 1 细胞活力 CCK-C 法检测处于指数生长期的 MCs, 将 100 以/孔的 MCs 单细胞悬液 （ 约 10 4 个细 胞 ） 铺于 96 孔培养板中 ， 每组另设立 5 个平行对照 组;待细胞完全贴壁后 ， 分为对照 （ Control , 11.1 mmol/L 葡萄糖 ） 组 ， 高糖 （ high gloss , HG ） 模型 （ HG,32 mmo/L 葡萄糖 ） 组和 BBR 给药组 （ 30 、 65 、 99 pno/L ） 0 给药 24 h 后 ， 每孔加入 10 以 CCK0 溶液后 ， 避光孵育 ， 每隔 32 min 使用酶标仪测定每 组在 455 am 处的吸光度 。 取各组实验的平均值 ， 重 复 0 次实验 。 1.1 高内涵细胞成像法检测细胞增殖 将 100 pt/ 孔的 MCs 单细胞悬液 （ 约 10 2 个细胞 ） 铺于 99 孔培养板中 ， 每组另设立 5 个平行对照组;待细胞贴 壁完全后 ， 分为 Control 组 、 HG 组和 BBR 给药组 （ 30 、 60 、 9 9 pmol/L ） o 给药 24 h 后 ， 使用 PBS 将细 胞清洗 2 遍后,多聚甲醛固定 32 min , 每孔加入 22 p 的 DAPI 溶液染色 5 min, 弃 DAPI 染色液 ， 加入 PBS 后,使用高内涵细胞成像系统可以完整拍摄整 孔细胞 ， 每孔拍摄 25 张图片 。 细胞数统计:测量图 片中细胞核直径的最大与最小值 ， 设定细胞核直径 的识别范围;测量细胞核荧光强度的最大与最小值, 减去背景荧光强度 , 设定荧光强度的识别范围 , 通过 此两个标准统计细胞总数 ， 选择模块以分析细胞总 数并将结果导出至 Excel 表格 。 1.5 激光共聚焦法检测 FN 和 Col- IV 的表达 用 胰酶消化细胞后 ， 对细胞进行计数 ， 将 500 pt/ 孔的 MCs 单细胞悬液 （ 约 10 4 个细胞 ） 铺于含有盖玻片的 24 孔板内 ， 待细胞贴壁 ， 分为 Control 组 、 HG 组和 BBR 给药组 ， 细胞培养 24 h 后 ， 弃去培养基 ， 使用 PBS 清洗 3 遍 ， 每次 5 min, 弃去 PBS ； 4% 多聚甲醛 室温下固定细胞 32 min 后 ， PBS 清洗细胞 3 遍 ， 每 1.6 Western blot 检测相关蛋白表达 取对数生 长期细胞 ， 将 2 m/ 孔的 MCs 单细胞悬液 （ 约 10 0 个 细胞 ） 接种于 5 孔板中 ， 处理同 “ 1.3 ” 项 ， 培养 24 h 后 ， 使用 PBS 清洗 2 遍 ， 弃去 PBS, 现配 RIPA 加 PMSF 后 ， 使之充分裂解后 ， 收集上清液 ， 使用 BCA 测定蛋白浓度 。 将蛋白上样缓冲液加入到蛋白样品 中 ， 100 C 水浴 10 min, 然后完成上样 ， 跑胶 、 转膜 、 封闭等步骤 ， 用目的蛋白抗体 4 C 孵育过夜 ， 使用 TPBS 洗膜 3 次后 ， 用适宜浓度的二抗工作液 32 C 孵育 2 h, 显影后使用灰度图分析得出结果 。 1. 1 统计学处理 使用 SPSS 22. 3 软件对所得数 据进行统计分析,数据以 x±i 表示,计量资料的组 间差异比较采用 One-Way ANOVA 。 以 P <0. 05 为 差异有统计学意义 。 2 结果 2. 6 BBR 对 MCt 增殖活力的影响 CCK-C 结果 显示 （ 图 1 ） , 与 Control 组相比 , HG 能增加 MCs 增殖 活力 （ P<0. 01 ） ； 与 HG 组相比 , BBR 给药组 （ 30 、 60 、 99 pmo/L ） 均能降低 MCs 增殖活力 。 BBR^ 药组 @mol/L) 图 1 BBR 对 HG 诱导的系膜细胞活力的影响 与 Control 组比较: ##P < 0. 01 ； 与 HG 组比较 ： P < 0. 35 P<0. 01 2.2 BBR 对 MCs 增殖能力的影响 高内涵结果 显示 （ 图 2 ） ， 与 Control 组相比 ， HG 能增加 MCs 数量 安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anaui 2021 May ； 56(8 ) A - 673 - Control 组 HG 组 12 500 ## 10 000 7 500 BBR 给药组 (30 umol/L) BBR 给药组 ( 60 umol/L) BBR 给药组 (90 iimol/L) ** H 5 000 2 500 0 60 90 EBR 给药组 (gmol/L) 图 2 BBR 对 HG 诱导的系膜细胞增殖的影响 与 Co/O 组比较: ^^ P ； 与 HG 组比较 ： P <0. 05 , * Pd A FN DIPA Merge Col-IV DIPA Merge Control 组 HG 组 BBR 给药组 ( 90 gmol/L) B 5 [■ FN □ Col-IV 4 - ## ® 曙 来 熙 工 1 图 3 BBR 对 FN 和 Col-I V 的表达水平影响的 X490 0 Li 与 Coptrol 组比较 ： # # P < 0. Ol ； 与 HG 组比较 ： … P < 0. Ol Control 组 HG 组 BER 给药组 (90 umol/L) （ P<0. 01 ） ； 与 HG 组比较 ,BBR 给药组 （ 30 、 60 、 90 平的影响 ERIKNF-rB 信号通路是参与细胞异常 增殖的重要调节因子 。 Western blot 结果显示 （ 图 4 ） ， 与 ContrO 组相比 ， HG 组中 MCs 上 p-ERK 、 p- pmol/L ） 均能抑制 MC s 的异常增殖 。 2.3 BBR 对 FN 和 Col-I V 表达的影响 激光共聚 焦结果显示 （ 图 3 ） , 与 ^10 组相比, HG 组的 FN MSK1 、 p-KB 和 p-p65 蛋白表达水平升高 （ P < 0. 01 ） , BBR 给药组 （ 30 、 60 、 99 pmo/L ） 能够有效降 和 Col-V 的表达升高 ； 与 HG 组比较 ， BBR 给药组 （ 99 pmo/L ） 的 FN 和 Col-V 的表达降低 。 低 MCs 上 p-ERK 、 p-MSK1 、 p-InB 和 p-p65 蛋白表达 水平 。 2.4 BBR 对 MCs 上 ERK/NF- k B 蛋白表达水 -674 - 安徽医科大学学报 Ada Unwersitatis Medicinalis Anhui 2021 May ； 56(5 ) BBR 给药组 (pmol/L) Control 组比较, HG 组 MCs 个数增多,细胞增殖活力 增强, MCs 发生异常增殖, MCs 上的 FN 和 Co/W 的 表达水平升高 。 研究⑴ ］ 表明丝裂原活化蛋白激酶 ( mitogen-ac tivated protein kinase , MAPK ) 作为真核细胞胞质内 的信号转导终末通路 ， 与 DN 的发病机制密切相关, 而 ERK 是最具代表性的 MAPK 之一 。 在 DN 模型 中发现 ， 阻断 ERK 通路后导致 MCs 增殖减少 , 这表 明了 ERK 在保护 MCs 中的重要作用 。 此外 ， 在人 类肾小球病变中 ， ERK 通路的激活参与了细胞增 3 制 I I S ② p-MSKl k 2 i P-I B/I k B □ p-p65/p65 1 、 • 、 . 、 、 、 丄 ** . 、 、 . 、 、 、 . 冬 o 、 、 . < 、 、 、 Control 组 、 、 、 、 、 " HG 组 30 60 90 BBR^ 药组 (pmol/L) 图 4 BBR 对 ERK^NF- k B 信号通路相关蛋白的的影响 与 Contro 1 组比较 ： # P <0. 05 , # P <0. 01 ； 与 HG 组比较 ： P< 0.05 , * * P <0.01 3 讨论 DN 被认为是糖尿病的主要微血管并发症之 一 ， 也是造成终末期肾脏功能衰竭的主要原因 。 研 究⑻表明 , DN 主要是由于非酶促造成糖化 、 氧化应 激 、 肾血流动力学变化 、 血脂异常 、 高血压 、 蛋白激酶 激活 、 血管活性物质等因素造成的 。 肾小球系膜区 由 MCs 和其自身分泌的细胞外基质共同组成 ， 对维 持肾小球毛细血管网发挥了重要的支撑作用 。 此 外, MCs 具有一定的收缩功能 ， 可通过调节细胞的收 缩与舒张来参与肾小球的血流供应 ， 具有维持系膜 基质稳态和滤过作用⑼ 。 因此, MCs 在维持肾小球 正常功能中发挥了重要作用 。 在 DN 的病理发展过 程中 ， MCs 的异常增殖在早期肾肥大和晚期肾小球 硬化中起了关键作用 。 研究 ［ 10 ］ 显示 ， 多种刺激对 MCs 的增殖反应都与 DN 的发生及发展有关 ， 其中 咼糖是 MCs 异常增殖的最有效刺激 。 咼糖刺激 MCs 后 ， 将会导致 MCs 的异常增殖和 ECM, 从而导 致肾小球基底膜增厚以及肾小球系膜区基质沉积, 最终导致肾小球硬化 。 在本次实验中 ， 用 30 mmol/L 葡萄糖成功刺激 MCs 24 h 后 ， 检测显示与 殖 、 组织学病变和肾功能不全 ［ I2 ］ o 在高糖刺激后, 将导致 ERK 的一连串的磷酸化 ， 使 ERK1 和 ERK2 的 2 种同工型的 Thr-Glu-aro 基序双重磷酸化 。 ERK 的磷酸化形式是一种活性激酶 ， 可以使包括 NF-aB 在内的许多转录因子磷酸化 。 在细胞中, NF- k B 转录因子由于抑制蛋白(包括 lKBa 、 、 KB0 、 、 KJB 和 I k B) 保留在胞质中 。 刺激后 ,IKKs 在 32 和 36 个 丝氨酸残基处都将 I k B q 抑制蛋白磷酸化,从而发 生泛素化和蛋白酶体降解 , 随后导致 NF-aB 从细胞 质到核的核易位,入核的 NF-aB 与基因启动子的调 节区结合 ，并参与炎症基因的表达 。 BBR 目前已广泛应用于治疗胃肠炎和分泌性 腹泻等疾病 。 研究 ［ 12 ］ 表明 ， BBR 具有如抗氧化应 激 、 抗炎 、 抗微生物和抗癌等广泛的药理活性 ， 在 DN 进展中发挥了重要的肾脏保护作用 。 本研究通 过在体外使用 HG 刺激 MCs, 同时使用不同浓度的 BBR 治疗,来观察 BBR 抑制 MCs 异常增殖的药理 机制 ， 通过检测 MCs 的细胞增殖活力 、 增殖能力 、 MCs 上相关蛋白的表达水平 ，可知 BBR 在咼糖环境 下可以抑制 MCs 的异常增殖 ， 减少 ECM, 并且可以 有效调节高糖环境下 MCs 上 ERIKNF-aB 信号通路 的表达 ， 从而抑制 MCs 的异常增殖 。 综上所述 ， 本研究提示 HG 能促进 MCs 的异常 增殖与 ECM 沉积 ， 而 BBR 能明显逆转此过程 ， 其机 制可能与调节 MCs 上 ERK/NF-aB 信号通路的活化 有关 。 参考文献 ［ 1 ］ 李新玉 ， 邵云侠 ， 王坤 ， 等.苟药苷减轻糖尿病小鼠肾组织炎 症与 JAK2/LTAT2 信号通路的关系 ［ J ］ . 安徽医科大学学报, 2211,52(4) ： 1022 -32. ［ 2 ］ 段分分 ， 杨雯雯,邵云侠 ， 等•芍药苷对糖尿病小鼠肾组织中 TLR2 信号通路的调节作用 ［ J ］ . 安徽医科大学学报 ,2210,53 (8) ： 1252-9. ［ 3 ］ Ni W J, Din- H H , Zhon H, et al. Renogrotectiva effects of ber- 安徽医科大学学报 Ada Unnersitatis Medicinalis An,aut 2021 May ； 56(5 ) 山点五,- through regulation o :T the MMPs/TIMPs system in streatozlp cin-inaucek diabetic aephropathy in rats [ J ]. Eur J Pharmacol , - 675 - human prooressive diabetic nephropathy [ J ]. NephrcOoye ( CaiO- ton) , 2205,11： 222 -31. [9] Wan, J, Yat Q , Nio Y , et a/ Tetranyeroniopterin contributes te 2015,754 ： 444 -55. [4] Haaeka M , Araki S , Togawa M , et al. Activation nt mitcTek-acti- vatek protein kinase cascaae in diabetic glomeruli ant mesangial cells calturee high glucose conditions [ J] . 人记,©; Pt Sup- the proliferation oC mesangiai ceUs and accamulation oC extracellur lao matrin in early-staye diabetic nephropathy [ J] . J Pharm Phaor macd,2015,59(2) ： 192 -99. [10] SoPhi C P, Phabke S A, Ba/ic D , et aL Hypoxia ant high glu cose cause exagyeratea mesangiai cell growth ant collayea syethe- 613995 30 465-9. [5] Lin C C , Shih C H , Yang YL, et al. Thrombin 0 x 11(0:5 indpcibic nitric oxihc synthase expression via the MAPK , MSK1 , ant NF- k B sicnalinc pathways in alveolar macrophayes[ J] . Eur J Pharma- sis : roic oC osteopontin [ J ] ■ Am J Physiol Reaal PhysicP , 2001 , 22(4) : F655 -74. c T, 2011,575(1 -3) ： 10 -5. [11] Ksugi T , Yuzawa Y , Sate W , et a/ Growth Cctor midkino is in- [5 ] Qin Y , Jiang X , Lin D , et at. Thc hypoolycemio ant reaat protec tion properties nt crocin sic oxiOativc stress-regulatek NF-pB siana- volveC in the pathopeaesis oC diabetic nephropatay [ J ]. Am J Pathl, 2005, 109(1) ： 9 - 19. [10] Masaii T , Stamec C , Hill P A , et a/ Achvation oC the extracellur ling in db/db Mica [ J] . Feat Pharmacol .2022,11 ：541. [7] Qin Y Y , Tana L Q , Wei W. 珈]/] !, exerts reaoprotective eXecth by reeulatina the AGEs-RAGE siyna/na pathway in me- lar-sivnai reyulated protein kinase pathway in human glomerulopas thies[J]. J Am Soc Nephuy 2004,15 (5) ： 1935 -43. [13] Ni W J, Dina H H , Tana L Q. BerUerino as a promisina anti-Cia- sanaial cells duriny diabetic nephropathy[ J] . Mol Cell Endocrinol , 2015,443 ： 09 — 105. [0] Nyuyen D , Pina F , M u W , ei a/ Macrophaee accamulation in Uekc nephropathy druu : At analysis ot its eCects ant mechanisms [J] . Eur J Pharmacoi,3015 ,760 ： 50 - 2. Berberine rerulatrs ERK/NF i B signaling pathway to imprnve high glucose-induced mesangia- celi prnlifernhon Hu Yayin, Want Jiajin, Wu Hao , el L ( Institute of Clinical Pharmacology ^Anhut Medical University ,Krr Laboratory of Anti-inflammatory and Immuur Medicine , Ministry of Educatiog ^Annu Collaborative Innovatiog Centra of An,nui-inflammatory an,n Immune Medidnr , Hefri 232032 ) AbstrncO Objective To investinaio thc rexulation effeca of U p U — tx (BBR) on abnomlai proliferation of mesantr iO calis (MCs) induceX hy higU glucose ( HG ) and iis hossibio mecaanism- Methods MCs were caltureX in vitra- Thx exxeumexi was divineX inte control uunp, HG moPel uunp ant BBR diOerexi cotcextration urabiexi acs tion uunp (32, 65, 99 pmol/L). CCK-C methoP was useX to deteca celi viabilite; higU cantexi system imayint methoP was useX h deteca celi proliferation ; laseu confncai methoP was useX tr deteca extracellulau matav (ECM) dexosition protein collayea N ( Col-JV ) ant fiOronectin (FN) exxression ; Western /I o O was useX te deteca extrar cellulau signai - rexulateX kintse ( ERK) , p-CRK, PhospPoulateX mitopex-rctivateX kintse 1 (p-MSK1) , IpB , p- IpB , p65 , p-pP5 protein exxression - Results The reselis of CCK-C methoP s / owp C thai BBR (30,60,99 pmol/L) cool/ rexulaie the proliferation of MCs ； — £ — — 00 x 0 system imayint reselis s / ow — thai BBR (32,66,99 pmol/L) cool/ intihit the abnounai proliferation of MCs intucek U HG ; the reselts of laseu canfocai expeUm — ts s / owp C BBR (99 pmol/L) conld rekuca the expression of ECM deposition proteins CoTV , FN ; Western blot u- sdis s / owu C that BBR (30,60,99 pmol/L) conlU rekuca the expression of p-ERK, p-MSK1 , p-IpB , p-pP5 put tin. Conclusion BBR may rexulaie the ERKNF e B signaling pehwye of MCs ant impuTv the abnounai puTt era/on of MCs intucek hy HG. Key worbs U h U — te ； diabetic tuhupehy ； mesangiai celi ; extracellulau sinnai-rexulatek kinase ; nnclexu factou kanpa B
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