2024年4月16日发(作者：华为手机强行恢复出厂)

化学分析计量　

ＣＨＥＭＩＣＡＬ　ＡＮＡＬＹＳＩＳ　ＡＮＤ　ＭＥＴＥＲＡＧＥ　

Ｖｏｌ　２２．ＮＯ．６　

ＮＯＶ　２Ｏｌ３　

一　Ⅲ　

荧光色谱一柱后光化学衍生法测定　

食品中的黄曲霉毒素Ｂ１　

～　

期　一一　帅　

一　

一　

摘要

丁轶聪，王桂苓，张伟伟　

（阜阳市产品质量监督检验所，安徽阜阳２３６０００）　

采用免疫亲和层析柱吸附食品样品中的黄曲霉毒素Ｂ　，以荧光色谱一柱后光化学衍生法测定食品中黄曲　

一　Ⅲ　

过Ｌａｃｈｒｏｍ　Ｃ　色谱柱进行分离，以甲醇一水溶液（体积比为４５：５５）作为流动相，荧光检测器激发波长为３６０　ｎｍ、发　

霉毒素Ｂ　的含量。样品用甲醇一水溶液（体积比为７：３）混合，均质器高速搅拌提取，经免疫亲和层析柱纯化后，通　

射波长为４２０　ｎｍ，外标法定量。黄曲霉毒素Ｂ　的质量浓度在１－２０　ｎｇ／ｍＬ范围内与色谱峰面积线性关系良好，相　

关系数ｒ＝Ｏ．９９９　８，检出限为０．１￣ｔｇ／ｋｇ。在３个添加水平下，样品的加标回收率在８８．５％－９７．９％之间，相对标准偏差　

均小于３％（ｎ＝６）。该方法操作简单、定量准确，可用于食品中黄曲霉毒素Ｂ。的定量定性检验。　

关键词　荧光色谱；光化学衍生；黄曲霉毒素Ｂ，　

中图分类号：ＴＳ２０７．３　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８－６１４５（２０１３）０６—００５６—０３　

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆＡｆｌａｔｏｘｉｎ　Ｂｌ　ｉｎ　Ｆｏｏｄ　ｂｙ　Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ＿Ｐｏｓｔ－Ｃｏｌｕｍｎ　

Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ＤｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉＯｉｌ　Ｍｅｔｈｏｄ　

Ｄｉｎｇ　Ｙｉｃｏｎｇ，Ｗａｎｇ　Ｇｕｉｌｉｎｇ，Ｚｈａｎｇ　Ｗｅｉｗｅｉ　

（Ｆｕｙａｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｐｒｏｄｕｃｔ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ＆Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ，Ｆｕｙａｎｇ　２３６０００，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ａｆｌａｔｏｘｉｎ　Ｂｌ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ｓａｍｐｌｅ　ｗａｓ　ａｄｓｏｒｂｅｄ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｏａｆｆｉｎｉｔｙ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄ　ｔｈｅ　

ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ—ｐｏｓｔ—ｃｏｌｕｍｎ　ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｓａｍｐｌｅｓ　ｗａｓ　

ｍｉｘｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ（Ｖｏｌｕｍｅ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ　７：３），ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　ｈｏｍｏｇｅｎｉｚｅｒ　ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈ　ｓｐｅｅｄ　ｓｔｉｒｒｉｎｇ，ｐｕｒｉｉｆｅｄ　ｂｙ　ｉｍ—　

ｍｕｎｏａｆｉｆｎｉｔｙ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｂｙ　Ｌａｃｈｒｏｍ　Ｃ１８　ｃｏｌｕｍｎ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈａｎｏｌ—ｗａｔｅｒ（Ｖｏｌｕｍｅ　ｒａｔｉｏ　ｗａｓ　

４５：５５）ａｓ　ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ａｎｄ　ｌｆｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｄｅｔｅｃｔｏｒ　ｅｘｃｉｔａｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　３６０　ｎｍ，ｅｍｉｓｓｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｏｆ　４２０　ｎｍ，　

ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｅｘｔｅｒｎａｌ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｍｅｔｈｏｄ．１　０　ｎｇ／ｍＬ　ａｆｌａｔｏｘｉｎ　Ｂｔ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｐｅａｋ　ａｒｅａ　ｈａｄ　ａ　ｇｏｏｄ　

ｌｉｎｅａｒ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｃｏｅｆｉｆｃｉｅｎｔ（ｒ－＝０．９９９　８），ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｌｉｍｉｔ　ｗａｓ　０．１　ｇ／ｋｇ．Ｉｎ　ｔｈｒｅｅ　ｓｐｉｋｅｄ　ｌｅｖｅｌｓ，ｓｐｉｋｅｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ　ｗｅｒｅ　

８８．５％－９７．９％，ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　１ｅＳＳ　ｔｈａｎ　３％　：６）．Ｔｈｅ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉＳ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｃａｎ　

ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｉｎ　ｆｏｏｄ　ａｆｌａｔｏｘｉｎ　Ｂ１　ｏｆ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ａｎｄ　ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ　ｔｅｓｔ．　

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ　ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ；ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎ；ａｆｌａｔｏｘｉｎ　Ｂ１　

较低；薄层色谱法操作繁琐费时，误差较大；酶联免　

种食品、农产品和饲料中，甚至坚果、乳制品、调味品　疫法往往作为定性方法，检测结果重复性差；液相　

等一些常见食品中也能经常发现黄曲霉毒素¨　。黄　

色谱法采用衍生液衍生化法，衍生液对存放时间和　

曲霉毒素具有极强的毒性和致癌性，可引发动物的　环境都有要求且毒性较大，操作性差。　

笔者采用光化学柱后衍生器对黄曲霉毒素Ｂ．　

肝癌、肾癌、胃癌等，其中黄曲霉毒素Ｂ　的毒性是氰　

不需使用化学物质，不需冲洗步骤，没有　

化钾的１０倍，被确认为Ｉ类致癌物　ｊ。我国对部分　

进行衍生，

　

食品中黄曲霉毒素Ｂ　的限量标准：稻谷、大米、糙　

腐蚀性酸通过仪器，可延长液相色谱柱的使用寿命。

米不大于１Ｏ　ｇ／ｋｇ；豆类及其制品不大于５．０　ｇｇ／　

该方法参加并通过了２０１２年度山西出入境检验检　

ｋｇ；花生及其制品不大于１０　ｇ／ｋｇ；植物油脂（花　

疫局组织的“食用油分析能力验证计划”，表明该方　

生油、玉米油除外）不大于１０　ｇｇ／ｋｇ　Ｌ　３　Ｊｏ目前我国　

法可灵敏、准确地对食品中黄曲霉毒素Ｂ　的含量进　

发布的国家标准黄曲霉毒素Ｂ　分析方法一般采用　

联系人：丁轶聪；Ｅ—ｍａｉｌ：ａｈｄｙｅ＠１６３．ｃｏｍ　

收稿日期：２０１３—０８－２９　

黄曲霉毒素是由黄曲霉和寄生曲霉等真菌毒　

素代谢产生的一类有毒的真菌毒素，广泛存在于各　

液相色谱法等　。微柱筛选法、荧光光度法普及率　

薄层色谱法、微柱筛选法、酶联免疫法、荧光光度法、　

丁轶聪，等：荧光色谱一柱后光化学衍生法测定食品中的黄曲霉毒素Ｂ１　５７　

行检测。　

１实验部分　

１．１　主要仪器与试剂　

１．５买验步骤　

１．５．１标准溶液的制备　

准确移取０．５　ｍＬ黄曲霉毒素Ｂ　标准物质，用流　

动相定容至１００．０　ｍＬ，配制成质量浓度为５００　ｎｇ／ｍＬ　

液相色谱仪：ＨＩＴＡＣＨＩ　Ｌ－２０００型、配Ｌ一２４８５　

荧光检测器、在线脱气机、柱温箱，上海天美科学仪　

器有限公司；　

光化学衍生反应器：ＰｒｉｂｏＦａｓｔ　ＫＲＣ－２５型，北京　

的标准储备液，再将其用流动相逐级稀释，配制成黄　

曲霉毒素Ｂ　质量浓度分别为１．０，２．０，５．０，１０．０，２０．０　

ｎｇ／ｍＬ的系列标准工作溶液。　

泰乐琪生物科技有限公司；　

高速均质器：Ｔ８型，转速为５０００～２５０００　ｒ／ｍｉｎ，　

德国ＩＫＡ公司；　

甲醇：色谱纯；　

实验用水：屈臣氏蒸馏水；　

ＰＢＳ缓冲液：称取８．０　ｇ氯化钠、１．２　ｇ磷酸氢　

二钠、０．２　ｇ磷酸二氢钾、０．２　ｇ氯化钾，用９９０　ｍＬ水　

溶解，用浓盐酸调至ｐＨ　７．０，最后用水定容至１　０００　

ｍＬ；　

吐温２０－ＰＢＳ缓冲液：取１．０　ｍＬ吐温２０，加入　

ＰＢＳ缓冲液定容至１　０００　ｍＬ；　

黄曲霉毒素Ｂ，标准物质：１００　ｇｇ／ｍＬ（乙腈基　

质），北京泰乐琪生物科技有限公司；　

黄曲霉毒素Ｂ　免疫亲和层析柱：Ｐｒｉｂｏｆａｓｔ　

ＩｃＡ．０１０＿３　ｍＬ型，北京泰乐琪生物科技有限公司。　

１．２液相色谱条件　

色谱柱：Ｌａｃｈｒｏｍ　Ｃ１　８色谱柱（２５０　ｍｍ　Ｘ　４．６　

ｍｍ，５　ｍ）；流动相：甲醇一水（体积比为４５：５５），　

流量为０．８　ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５　ｏＣ；激发波长：３６０　

ｎｍ；发射波长：４２０　ｎｍ；进样体积：２０　。　

１－３样品处理　

如果是固体样品，称取０５．００　４－０．０１）ｇ粉碎的　

样品；如果是油脂则直接取样，无需处理。本次试　

验采用的是市售大豆植物油。　

准确加入１２５．０　ｍＬ提取液甲醇一水溶液（体　

积比为７０：３０）及５．０　ｇ氯化钠，以均质器高速搅拌　

２～３　ｍｉｎ后以４０００　ｒ／ｍｉｎ离心５　ｍｉｎ（或用槽纹滤　

纸过滤１，取１５　ｍＬ滤液加入３０　ｍＬ水稀释，用玻璃　

纤维滤纸过滤，收集全部滤液。　

１．４免疫亲和柱净化　

准确移取１５．０　ｍＬ滤液注入免疫亲和柱，调节　

流速约１—２滴／Ｓ，待溶液完全流出后，分别用１０．０　

ｍＬ的吐温－ＰＢＳ缓冲液和纯水以约２～３滴／Ｓ流　

速清洗免疫亲和柱，弃去全部流出液。用甲醇以１～２　

滴／Ｓ流速慢慢洗脱免疫亲和柱中待１２９１４物质，收集全　

部洗脱液并定容至２．０　ｍＬ，待测。　

１．５．２样品测定　

于开机前１０　ｒａｉｎ打开光化学衍生反应器，色谱　

仪按１．２色谱条件稳定后，分别取处理后的样液和　

系列标准工作溶液各２０　Ｌ进行测定，以色谱峰面　

积积分，绘制标准曲线。　

２结果与讨论　

２．１样品的前处理　

黄曲霉毒素Ｂ　易溶于甲醇，因此采用甲醇一水　

溶液作为提取溶剂，能够提高黄曲霉毒素Ｂ　的溶出　

率。免疫亲和柱的高选择性使样品处理大为简化，提　

取液用水稀释的目的是减少甲醇对免疫亲和柱的亲　

和力的干扰，样液过柱后用纯水淋洗是为了去除非特　

异性杂质　。同时对比了Ｐｒｉｂｏｆａｓｔ亲和柱和Ａｆｌａｔｅｓｔ　

亲和柱，结果无明显差异，本实验选择Ｐｒｉｂｏｆａｓｔ亲和　

柱。对样品进行衍生化的目的是为了增强黄曲霉毒　

素Ｂ　的荧光性，分为柱前衍生和柱后衍生。柱前衍　

生主要是采用试剂衍生，毒性大，不易保存，本试验采　

用柱后光化学衍生法简单易行，无污染。　

２．２色谱条件的选择　

黄曲霉毒素Ｂ　属于中等极性化合物，为了有　

利于色谱峰的分离和峰形的改善，分别采用Ｄｉａ—　

ｍｏｎｓｉｌ　Ｃ】８和Ｌａｃｈｒｏｍ　Ｃ１Ｒ色谱柱进行试验，在优化　

色谱条件过程中，分别使用了乙腈一水（体积比为　

３０：７０）、甲醇一水（体积比为４５：５５）两种体系的流　

动相，发现Ｌａｃｈｒｏｍ　Ｃ，　色谱柱和甲醇一水（体积比　

为４５：５５）的流动相能够得到更好的峰形和响应值，　

同时降低了检测成本。流量设定为０．８　ｍＬ／ｍｉｎ是　

因为流速过大、压力过高会缩短柱后光化学衍生器　

的使用寿命。优化条件后，样品的峰形尖锐、对称，　

分离效果较好。食用油添加黄曲霉毒素Ｂ．样品色　

谱图见图１。　

２．３线性范围和检出限　

以响应信号即峰面积Ｙ为纵坐标，黄曲霉毒素　

Ｂ　溶液的质量浓度Ｘ为横坐标进行线性回归。实　

验表明，黄曲霉毒素Ｂ　溶液的质量浓度在１．０～２０．０　

ｎｇ／ｍＬ范围内得线性方程为ｙ＝ｌ５１　１００ｘ－１０２９０，　

５８　化学分析计量　２０１３年，第２２卷，第６期　

表１加标回收试验和精密度结果　

品处理过程，对黄曲霉毒素Ｂ　的检测具有较高的灵　

０　５　ｌ０　ｌ５　２０　２５　３Ｏ　３５　４０　４５　

ｔ，ｍｉｎ　

敏度，且方法的准确度和精密度均有很大程度提　

高，适用于食品中黄曲霉毒素Ｂ，的分析检测。不足　

之处是出峰时间较长，导致样品检测时间较长，可　

图１　植物油添加黄曲霉毒素Ｂ　样品色谱图　

相关系数ｒ＝０．９９９　８。将标准品溶液稀释进样，以响　

应值３倍基线噪声对应的黄曲霉毒素Ｂ　浓度计算得　

以通过更换不同长度规格的光化学衍生反应器来进　

　

检出限为０．１　Ｉ．ｔｇ／ｋｇ，比ＧＢ／Ｔ　１８９７９～２００３标准中　

行改善。

高效液相色谱法规定的１　ｇｇ／ｋｇ的检出限提高一个　

数量级。　

２．４回收试验和精密度试验　

参考文献　

［１］郑燕，王远兴，李瑾瑾．液相色谱串联质谱法检测食品中的黄曲　

霉毒素［Ｊ］食品科学，２０１０，３１（２４）：３８４－３８６．　

［２］史莹华，许梓荣，冯建蕾，等．高效液相色谱法测定动物组织样品　

中黄曲霉毒素的残留量［Ｊ］．分析化学，２００５，３３（６）：８５０－８５２．　

为验证方法的准确性和可靠性，采用在空白　

样品中添加标准溶液的方法进行回收试验，３个质　

量浓度添加水平分别为２，５，１０　ｎｇ／ｍＬ，同时每个　

［３］ＧＢ　２７６１—２０１１食品安全国家标准食品中真菌毒素限量［Ｓ］．　

［４］ＧＢ／Ｔ　５００９．２３—２００６食品中黄曲霉毒素Ｂ。、Ｂ　、Ｇ。、Ｇ　的测定　

［Ｓ］．　

［５］ＧＢ　５００９．２４－２０１０食品安全国家标准食品中黄曲霉毒素Ｍ．和　

Ｂ　的测定［Ｓ］．　

［６］ＧＢ／Ｔ　１８９７９—２００３食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净　

化高效液相色谱法和荧光光度法［Ｓ］．　

［７］鲍蕾，吕宁，吴振兴，等．免疫亲和柱同时净化～ＨＰＬＣ法测定植　

物油中黄曲霉毒素和玉米赤霉烯酮［Ｊ］．食品工业科技，２０１３，　

３４（９１：３０６—３０８．　

质量浓度添加水平重复测定６次，加标回收和精　

密度试验结果见表１。由表１可知，平均回收率为　

８８．５％一９７．９％，测定结果的相对标准偏差小于３％，　

说明该方法具有较高的准确度和良好的精密度。　

３结语　

建立的荧光色谱一柱后光化学衍生测定食品中　

黄曲霉毒素Ｂ　的方法，减少了试剂污染，简化了样　

美利用诱导光子相互作用制造出全新分子形态　

不久前，据物理学家组织网报道，美国科学家携手，在特　

定的媒介下，诱导光子依附在一起形成了分子，这种全新的　

是因为里德堡封锁效应。在这种状态下，当一个原子被激发　

时，其周围的原子不能被激发到相同的程度，这就意味着，当　

两个光子进入原子云中时，第一个光子激发一个原子，但在　

物质形态不仅挑战了光子之间不会相互作用这一传统观念，　第二个光子激发相邻的原子之前，其必须向前移动。结果就　

是，两个光子在原子云中相互推拉，同时，它们的能量也从一　

个原子传递到另一个原子。　

卢金说：“这是一个由原子间相互作用调控的光子间相　

互作用，使两个光子像一个分子一样，而且，当它们退出媒介　

时，它们更有可能一起退出媒介。尽管这种效应并不常见，　

但它的确有用。”　

卢金解释称，首先，其可用于量子计算机内。光子被认　

也有望用于量子计算机、传统计算机以及其它领域。研究论　

文发表在不久前出版的《自然》杂志上。　

该研究的领导者、哈佛大学物理学教授米哈依尔・卢金　

表示，人们一直认为，光子没有质量，不会相互作用。但在我　

们制造的特定媒介中，光子之间发生了相互强烈的作用使得　

它们开始像拥有质量一样，并依附在一起形成了分子。很久　

以前，我们就对这种光子依附状态进行了理论探讨，但迄今　

为止，一直没有被观察到。　

为是最可能作为量子点携带量子信息的粒子，但其缺陷在于　

光子间不会发生相互作用。最新系统表明我们可以做到这　

一

在实验中，科学家们首先将铷原子泵人一个空腔中，接　

着，使用激光将原子云冷却到绝对零度之上几度，再用极微　

弱的激光脉冲将单个光子射人原子云中。卢金说，当光子进　

点。不过，我们还需要改进其性能，才能制造出一套实用　

的量子开关或光子逻辑门。　

入原子云中，其能量会激发原子沿着其路径行进，导致光子　

的速度急速下降。随着光子通过原子云，其能量也从一个原　

子传递到另一个原子，并最终同光子离开了原子云。　

但当卢金和同事将两个光子射入云中时，他们吃惊地看　

到，两个光子就像一个分子一样一起退出。卢金解释道，这　

卢金说，鉴于芯片制造商们目前面临的功耗挑战，这套　

系统甚至有望用于传统计算机中。目前，包括ＩＢＭ在内的　

多家大公司都在设法研发依靠光子路径的系统，这样的系统　

能将光信号转变成电信号。另外，这样的系统或许也能被用　

来制造复杂的完全由光制成的三维结构。　（科技日报）