2024年3月12日发(作者：什么牌子的笔记本电脑最好)

２０１２，ＶｏＩ．２９　Ｎｏ．９亿　与生物互程　

Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆Ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　

ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—５４２５．２０１２．０９．００９　

南极微生物絮凝剂产生菌的筛选、　

分子鉴定及适应性研究　

杜　宁　

（国家海洋局第一海洋研究所海洋活性物质重点实验室，山东青岛２６６０６１）　

摘要：从南极海水、海冰、底泥中分离得到７株产絮凝剂的菌株，通过１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列扩增方法进行分子鉴　

定，分别隶属于不动杆茵属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、节杆茵属（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、嗜冷杆茵属（Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、沙雷茵属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、　

假单胞茵属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）和假交替单胞茵属（Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）。改变培养基中碳源和氮源的组成并观察絮凝率的　

变化，筛选出在经济培养基条件下具有较高絮凝活性、同时对碳源和氮源具有普适性的菌株Ｉ＿２和Ｐ２—１３—１。　

关键词：微生物絮凝剂；１６Ｓ　ｒＲＮＡ；絮凝率；培养基　

中图分类号：Ｑ　９３９．３　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７２—５４２５（２０１２）０９—００４Ｏ—Ｏ３　

微生物絮凝剂是一类由微生物产生的可使水中的　

悬浮颗粒、菌体及胶体粒子凝聚、沉淀的一类高效、安　

全的水处理剂　卜　，其成分一般为糖蛋白、多糖、蛋白　

质、纤维素和ＤＮＡ等嘲。研究表明，极地微生物较常　

温微生物的胞外分泌物分子量更大、成分更复杂［６卅］。　

１．３方法　

１．３．１　絮凝剂产生菌的分离和筛选　

分别取海水、海冰和底泥，在蛋白胨固体培养基上　

采用平板划线法分离并纯化以获得纯菌种。将分离到　

的菌种置于液体培养基中，于５℃、１２０　ｒ・ｍｉｎ＿。、ｐＨ　

因此，作者以极地微生物为筛选目标，拟开发出在经济　

培养基、低温环境下絮凝效率高、产量大的微生物絮凝　

剂。　

值７左右条件下发酵培养７　ｄ。取发酵液测其絮凝率，　

将具有良好絮凝率的菌株作为复筛菌种。　

１．３．２活性菌株的分子鉴定　

细菌总ＲＮＡ提取，１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列扩增采用　

细菌１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因的通用引物，引物序列为：５，＿　

ＡＧＡＧＴＴＴＧＡＴＣＣＴＧＧＣＴＣＡＧ一３　和５＇－ＧＧＴＴＡＣ—　

ｌ　实验　

１．１材料、试剂与仪器　

海水、海冰和底泥为作者在第２５次南极科学考察　

中采集。　

８Ｏ目过筛高岭土。　

实验所用试剂均为分析纯。　

ＣＴＴＧＴＴＡＣＧＡＣＴＴ－３　。ＰＣＲ反应体系总体积为　

２　Ｌ，包括：１×ＰＣＲ缓冲溶液、１．６　ｍｍｏｌ・Ｌ－１　

ＭｇＣ１２、４×ｄＮＴＰ混合物各１００＃ｍｏｌ・Ｌ＿。，引物各　

１．０／￣ｍｏｌ・Ｌ＿。，Ｔａｑ　ＲＮＡ聚合酶１　Ｕ，模板ＲＮＡ　

１　Ｌ。ＰＣＲ反应条件为：９４℃５　ｍｉｎ；９４℃ｌ　ｍｉｎ，　

５３℃１　ｒａｉｎ，７２℃１．５　ｒａｉｎ，３０个循环；７２℃延伸　

７２１型可见分光光度计、磁力搅拌机、恒温振荡培　

养箱、高压灭菌锅、ＰＣＲ扩增仪、凝胶电泳仪。　

１．２培养基　

１０　ｍｉｎ。测序工作由上海桑尼生物科技有限公司完　

成。将所测定菌株的１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因序列与ＧｅｎＢａｎｋ　

数据库（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｂｌａｓｔ／ｂｌａｓｔ．　

ｃｇｉ）进行相似性比较分析。　

１．３．．３活性菌株碳、氮源适应性研究　

分别改变通用发酵培养基中的碳源、氮源，观察活　

通用发酵培养基：葡萄糖２０　ｇ，ＫＨ。ＰＯ　２　ｇ，　

Ｋ２　ＨＰＯ４　５　ｇ，ＮａＣ１　３．５　ｇ，（ＮＨ４）２　ＳＯ４　０．２　ｇ，尿素　

０．５　ｇ，酵母膏．０．５　ｇ，蒸馏水１０００　ｍＬ，ｐＨ值６．８～　

７．２，１２Ｏ℃灭菌２０　ｍｉｎ。　

基金项目：国家海洋局第一海洋研究所基本科研业务费专项资金项目（２０ｌＯＧ１５）　

收稿日期：２０１２一Ｏ５—２４　

作者简介：杜宁（１９８Ｏ一），男，山东济南人，硕士，实习研究员，主要从事极地海洋微生物及活性物质的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｕｎｉｎｇ：＠ｒｉｏ．　

ｏｒｇ．ｃｎｏ　

杜　宁：南极微生物絮凝剂产生菌的筛选、分子鉴定及适应性研究／２０１２年囊９霸　

性菌株絮凝率的变化，考察其碳、氮源适应性，筛选出　

表２　７株絮凝活性菌株１６Ｓ　ｒＲＮＡ序列同源性比较　

在经济培养基条件下具有较高絮凝活性的菌株。　

Ｔａｂ．２　Ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　１６Ｓ　ｒＲＮＡ　

１．３．４絮凝率测定　

ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　７　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗｉｔｈ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　

向１００　ｍＬ烧杯中加人０．２　ｇ高岭土、１　ｍＬ絮凝　

菌株　相似性最高菌株（收录号）　相似度／　

剂样品（微生物发酵液）、１　ｍＬ　１　ｇ・ｍＬ一１的ＣａＣ１ｚ溶　

Ｉｓ－１１—１Ｏ一１　Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ．Ｎ２２（ＪＱ６８７４０６．１）　９９．９３　

液，加蒸馏水至总体积５Ｏ　ｍＬ，调节溶液的ｐＨ值为　

Ｉ．２　Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ．ＳＨ一４３Ｂ（ＦＮ３７７７１７．１）　１ＯＯ．Ｏ０　

７．０，置于磁力搅拌机上首先２００　ｒ・ｍｉｎ　下快搅　

Ｉ一１—２　Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｇｌａｃｉｎｃｏｌａ（ＡＢ３３４７６９．１）　１００．００　

１　ｍｉｎ，然后８０　ｒ・ｍｉｎ　下慢搅４　ｍｉｎ。静沉２　ｍｉｎ，　

Ｐ２—１４—１　Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｇｒｉｍｅｓｉｉ　ＤＳＱ３（ＨＭ２１７１２２．１）　９９．７５　

Ｐ２－１４－２　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｆｚｕｏｒｅｓｃｅｎｓ　ＬＭＧ　５８３０（ＧＵ１９８１０９．１）９９．４３　

吸取上清液测定其５５０　ｎｍ处吸光度，同时以蒸馏水　

Ｐ３—０６—１　Ｓｅｒｒａｔｉａ　ｓｐ．Ｖ５（ＨＱ３３５００２．１）　９９．５７　

代替发酵液作对照。以絮凝率（Ｅ）表示絮凝活性，按　

Ｐ２—１３—１　Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ　ｓｐ．４８Ｘ（ＥＵ１００３９０．１）　９９．８５　

下式计算：　

Ｅ＝［（Ａ—Ｂ）／Ａ］×１００％　

从表２可看出，所分离到的７株活性菌株与Ｇｅｎ—　

式中：Ａ为对照上清液的０Ｄ　。值；Ｂ为样品上清　

Ｂａｎｋ数据库已有菌株的１６Ｓ　ｒＲＮＡ序列具有很高的　

液的０Ｄ。　。值。　

相似度，均在９９　以上；分别隶属于不动杆菌属　

２结果与讨论　

（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、节杆菌属（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、嗜冷杆菌　

属（Ｐｓ３，　ｒ０６口ｃ　ｒ）、沙雷菌属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、假单胞菌属　

２．１菌株的筛选　

（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）和假交替单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏ—　

从海水、海冰和底泥中共分离、纯化得到５６株菌　

ｍｏｎａｓ）。表明筛选到的南极活性细菌没有专属性，这　

株，经初筛得到有絮凝活性的菌株１８株，再经复筛和传　与目前已报道的产絮凝剂微生物种类多达几十种以　

代培养，得到７株具有稳定高絮凝活性菌株，见表１。　

上［１叼相吻合。　，　

表１　产微生物絮凝剂菌株筛选结果及其生存环境　

从现有研究来看，微生物絮凝剂为多糖蛋白、粘多　

Ｔａｂ．１　Ｔｈｅ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｆｉｏｃｃｕｌａｎｔｏｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　

糖和纤维素等［１　。结合本实验筛选到微生物的生存　

ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｌｉｖｉｎｇ　ｅｎｖｉｏｒｎｍｅｎｔ　

环境来看，正是由于南极恶劣的自然环境，迫使生活在　

菌株　来源　温度／℃　盐度／　水深／ｍ　絮凝率／　

其中的细菌需要在胞外分泌大量的活性物质来抵御环　

ＩＳ－１Ｉ－１０－Ｉ　泥样　一１．７　３３．７　３８０　７９．７５　

境的侵害，而这类物质同时也具备了絮凝活性，这为以　

Ｉ－２　冰样　一１０．０　１２．１　０　８０．２５　

后改变培养条件，刺激活性菌株提高絮凝活性提供了　

Ｉ－１—２　冰样　一１０．０　１２．１　０　８２．２５　

理论基础。　

Ｐ２—１４－１　泥样　一１．７　３３．７　４５２　５２．５０　

２．３活性菌株的碳、氮源适应性　

Ｐ２一ｌ４—２　泥样　一１．７　３３．７　４５２　８３．７５　

２．３．１碳源（表３）　

Ｐ３—０６－１　泥样　一１．７　３３．７　２９７５　５２．００　

表３　碳源对菌株絮凝活性的影响　

Ｐ２—１３－１　泥样　一１．７　３３．７　１１４　８３．２５　

Ｔａｂ．３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｎ　ｆｌｏｃｃａｌａｔｉｏｎ　

ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　

从表１可看出，所筛选的７株活性菌株均来自泥　

样和冰样，表明南极产絮凝活性的微生物以生活在海　

冰冰层和底质沉积物中为主。这是由于海冰冰层冰晶　

形成的胁迫以及底质沉积物的影响造成了这些菌株胞　

外分泌物的多样化与大量化，为分离纯化具有絮凝活　

性的物质提供了基础。　

２．２活性菌株的１６Ｓ　ｒＲＮＡ序列分析　

对筛选到的７株具有絮凝活性的南极细菌基因组　

ＲＮＡ进行扩增，获得了长度约为１．４　ｋｂ的１６Ｓ　ｒＲＮＡ　

序列，经比对分析后提交ＧｅｎＢａｎｋ数据库，获得其同　

源相似性比较结果，见表２。　

从表３可知，当培养基中原有葡萄糖含量增加时，　

杜　宁：南极微生物絮凝剂产生菌的筛选、分子鉴定及适应性研究／２０１２年■９期　

微生物的絮凝活性并没有明显提高，相反菌株Ｐ３－０６－Ｉ　

失去了絮凝活性。以麦芽糖、乳糖和蔗糖作碳源时，虽　

专属性，分别隶属于不动杆菌属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、节杆　

菌属（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ）、嗜冷杆菌属（Ｐｓ　ｃ　ｒ０６ｎｃ￡Ｐｒ）、沙　

然它们同属最简单的二糖，但是不同微生物将其降解　

成单糖葡萄糖的能力却有着很大的差别，这对降低大　

规模发酵成本有着很大的参考意义。另外，以复杂的　

雷菌属（Ｓｅｒｒａｔｉａ）、假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）和假交　

替单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ）。改变培养基中碳源　

和氮源的组成并观察絮凝率的变化，筛选出在经济培养　

基条件下具有较高絮凝活性，同时对碳源和氮源具有普　

适性的菌株Ｉ＿２和Ｐ２—１３—１，可以作为下一步大规模发酵　

研究微生物絮凝剂的实验菌种。　

参考文献：　

［１］程金平，郑敏，张兰英，等．影响微生物絮凝剂产生的因素研究　

［Ｊ］．环境科学与技术，２００１，２４（３）：２８—３１．　

Ｅ２］王镇，王孔星，谢裕敏，等．几株微生物絮凝剂产生菌的特性研究　

［Ｊ］．微生物学报，１９９５，３５（２）：１２１—１２７．　

［－３１　Ｌｅｅｙ　Ｎ，Ｍａｇｄａｓｓｉｓ　Ｓ，Ｂａｒ－Ｑｒ　Ｙ．Ｐｈｙｓｉｃｏ—ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｓｐｅｃｔｓ　ｉｎ　ｆｌｏｅ—　

ｃｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｅｎｔｏｎｉｔｅ　ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎｓ　ｂｙ　ａ　ｃｙａｎｏｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｂｉｏｆｌｏｅｃｕｌａｎｔ　

多糖（可溶性淀粉）为碳源时的絮凝活性为０，说明所　

筛选的微生物不具备降解多糖的能力，这可能是由于　

南极环境中碳源种类、含量较少。在最为廉价的蔗糖　

实验中，菌株Ｉ一２、Ｉ一１—２、Ｐ２—１４—１、Ｐ２—１４—２和Ｐ２—１３—１的　

絮凝率保持在８０　９／６以上，表明其具有碳源普适性。　

２．３．２　氮源（表４）　

表４　

Ｔａｂ．４　

氮源对菌株絮凝活性的影响　

Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｏｎ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　

ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　

［Ｊ１．Ｗａｔｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９２，２６（２）：２４９—２５９．　

Ｅ４１　Ｔｏｅｄａ　Ｋ，Ｋｕｒａｎｅ　Ｒ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ　ｆｒｏｍ　Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ　ｃｕｐ—　

ｉｄｕｓ　ＫＴ２０１［Ｊ］．Ａｇｒｉ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，１９９１，５５（１１）：２７９３—２７９９．　

［５１敖黎鑫，邵承斌，卢辉，等．微生物絮凝剂产生菌ＨＦ－８的筛选与培　

养条件优化［Ｊ］．重庆工商大学学报（自然科学版），２００９，２６（５）：　

４５　１－４５６．　

［６］Ｂｌｕｎｔ　Ｊ　Ｗ，Ｃｏｐｐ　Ｂ　Ｒ，Ｍｕｎｒｏ　Ｍ　Ｇ　Ｈ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｒｉｎｅ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｏｄ—　

ｕｃｔｓ［，Ｊ￣．Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ　Ｒｅｐ，２００４，２１（１）：卜４９．　

［７］　Ｍｉｎｃｅｒ　Ｔ　Ｊ，Ｊｅｎｓｅｎ　Ｐ　Ｒ，Ｋａｕｆｆｍａｎ　Ｃ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｗｉｄｅ　ｓｐｒｅａｄ　ａｎｄ　

ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｆｌ　ｍａｊｏｒ　ｎｅｗ　ｍａｒｉｎｅ　ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅ　ｔａｘｏｎ　

ｉｎ　ｏｃｅａｎ　ｓｅｄｉｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２００２，６８（１０）：　

从表４可知，南极产微生物絮凝剂活性菌对分子　

量小、结构简单的无机营养盐有着更好的利用能力。　

在最为廉价的氯化铵实验中，菌株Ｐ２－１３－１、Ｉ－２的絮凝　

５００５—５０１１．　

［８］Ｓｔａｅｈ　Ｊ　Ｅ　Ｍ，Ｍａｌｄｏｎａｄｏ　Ｌ　Ａ，Ｍａｓｓｏｎ　Ｄ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ａｐ—　

ｐｒｏａｃｈｅｓ　ｆｏｒ　ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ　ａｅｔｉｎｏｂａｅｔｅｒｉａｌ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｉｎ　ｍａｒｉｎｅ　ｓｅｄｉ—　

ｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｅｎｖｉｒｏｎ　Ｍｉｅｒｏｂｉｏｌ，２００３，６９（１０）：６１８９—６２００．　

［９］Ｄａｗｉｄ　Ｗ，Ｇｉｌｌｉｋｏｗｓｋｉ　Ｃ　Ａ，Ｈｉｒｓｅｈ　Ｐ．Ｐｓｙｃｈｒｏｐｈｉｌｉｃ　ｍｙｘｏｂａｅｔｅｒｉａ　

率分别为８５．Ｏｏ　９／６、４１．Ｏ６％；而在较廉价的硫酸铵实　

验中，菌株Ｉ一２、Ｐ２—１４—１和Ｐ２—１３—１均表现出较高的絮　

凝率。表明菌株Ｉ一２和Ｐ２—１３～１具有氮源普适性。　

ｆｒｏｍ　ａｎｔａｒｃｔｉｃ　ｓｏｉｌｓ［，Ｊ］．Ｐｏｌａｒｆｏｒｓｃｈｕｎｇ，１９８８，５８（Ｚ／３）：２７１—２７８。　

［１０１黄卫红，熊金水，刘彬彬．微生物絮凝剂ＥＢＵ—ｌ的化学性质分析　

［Ｊ］．环境工程学报，２００９，３（５）：８２５—８２８．　

３　结论　

从南极海水、海冰、底泥中分离得到７株产絮凝剂　

的菌株。分子鉴定表明，筛选到的南极活性细菌没有　

［１１］王卫平，朱凤香，陈晓呖，等．微生物絮凝剂的研究进展及其应用　

前景［Ｊ］．安徽农学通报，２００９，１５（１９）：４５—４８．　

Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ　Ｅｘｐｌｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　

Ａｎｔａｒｃｔｉｃ　Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　Ｆｌ０ｃｃｕｌａｎｔ－ＰｒＯｄｕｃｉｎｇ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　

ＤＵ　Ｎｉｎｇ　

（Ｆｉｒｓｔ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｏｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙ，Ｋ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｍａｒｉｎｅ　Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ　Ｓｕｂｓｔａｎｃｅ，Ｓ０Ａ，Ｑｉｎｇｄａｏ　２６６０６１，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｅｖｅｎ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ—ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ａｎｔａｒｃｔｉｃ　ｓｅａｗａｔｅｒ，ｓｅａ　ｉｃｅ　ａｎｄ　

ｍａｒｉｎｅ　ｓｅｄｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｗａｓ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｗａｙ　ｏｆ　１　６Ｓ　ｒＲＮＡ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｍ—　

ｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ．Ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅｙ　ｂｅｌｏｎｇｅｄ　ｔｏ　Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ，Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ，Ｐｓｙｃｈｒｏｂａｃｔｅｒ，Ｓｅｒ—　

ｒａｔｉａ，Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｎｄ　Ｐｓｅｕｄｏａｌｔｅｒｏｍｏｎａｓ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ｗｅｒｅ　

ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅ　ｂａｃｔｅｒｉａ，Ｉ－２　ａｎｄ　Ｐ２—１３—１，　

ｗｅｒｅ　ｏｆ　ｕｎｉｖｅｒｓａｌ　ａｄａｐｔａｂｉｌｉｔｙ　ｔｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｒｂｏｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｅｎ　ｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　ｈａｄ　ｈｉｇｈｅｒ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖ—　

ｉｔｙ　ｉｎ　ｅｃｏｎｏｍｉｃ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ．　

Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｆｌｏｃｃｕｌａｎｔ；１６Ｓ　ｒＲＮＡ；ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ；ｃｕｌｔｕｒｅ　ｍｅｄｉｕｍ