2024年2月8日发(作者：)

南　放墨区　２０１３年第４期（总第１７６期）　ｄｏｉ：ｌＯ．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９０７．２０１３．０４．００３　水牛冷冻精液稀释液中添加复合ＶＢ对精子品质的影响　雷虹，易康乐　。燕海峰，李昊帮。孙鏖。张佰忠，宗占伟　（湖南省畜牧兽医研究所，湖南长沙４１０１３１）　摘要：在水牛冷冻稀释液中添加不同浓度的复合Ｖ　，检测其对水牛冷冻精液质量的影响。结果显示，在精液冷冻稀　释液中添加３ｍＬ／１００ｍＬ复合ＶＢ，可提高水牛精液冷冻复苏后的活力和顶体完整率，对精子的质膜完整性和　ＤＮＡ完整性影响不显著。结果表明，在冷冻稀释液中添加一定浓度的复合Ｖ。能够提高水牛冷冻精液质量。　关键词：水牛；冷冻精液；复合ＶＢ　中图分类号：￥８２３．３４　文献标识码：Ａ　文章标号：１００６—４９０７（２０１３）０４—０００５－０３　现在家畜精液冷冻技术在不断的完善和创　温度、渗透及氧化应激反应对精子顶体及膜的影　新，但在精子冷冻程序上并没有根本性的创新改　响。进一步分析不同动物种间及个体间精子膜的　进。实践中，冷冻和解冻后的精子即使在质膜完整　分子组成结构，开发新型保护剂和膜保护剂应用　且泳动轨迹正常的情况下，其受精能力还是明显　于哺乳动物的精液冷冻保存中，应用新技术对精　与新鲜精液有差异。如果要使解冻后精子的品质　子质量进行有效的评估和检测，都将是以后精液　接近于鲜精，就要对现有的精液保存技术和程序　冷冻保存技术改进的重点方向【”。　做进一步的改进。通过对影响精子冷冻相关因素　本研究中，利用低渗膨胀和吖啶橙诱发荧光　进行深入的研究分析，探索冷冻损伤的原因以及　两种检测方法，结合顶体完整性检测数据，进一步　※通讯作者：易康乐（１９８０￣），男，汉族，博士，副研究员，主要从事牛繁殖新技术的研究。　的发展和国际化进程让不同国家之间的疾病互相　６小结　传播嘲。　Ｈ７Ｎ９的发生再一次给人们敲响了警钟，按照　５预防和控制人兽共患病的方法　现在的社会发展速度，这样令人恐慌的人兽共患　５．１政府方面　病在未来还会有发生，这不仅仅是一个小小的传　加强宣传，提高人民的防控意识；建立可持续　染病，而是关乎人类生存健康的大事。为了最大限　的发展策略，提倡人和自然和谐发展；建立健全动　度的保障人们的健康安全和社会的发展稳定，人　物防疫各项法律法规，做到早发现、早处理；鼓励　民与人民、国家与国家必须携手共同面对，合理利　并支持科研研究；加强国际交流与合作　。　用有限资源，最终实现可持续发展。　口　５．２研究人员和医疗工作者方面　做到每一个环节都严格操作，避免有害物质、　参考文献：　变异病毒和细菌流出，同时防止自身感染传染　【１】侯顺利．浅谈人兽共患病的疫情处置技术方案［Ｊ】．畜牧　病；加强人医与兽医的合作交流，联合防控人兽共　兽医科技信息，２０１２（２）：３２—３３．　患病。　【２】于思庶．防范来自动物的进攻——专家谈人兽共患病　５．３人民群众方面　【Ｊ】．传染病网络动态，２００４，５期：３７—３９．　积极关注政府发布的人兽共患病防控方法，　［３］朱科伦，朱郇悯，曾文铤，等．人兽共患病对传染病学的新　提高防控意识；养成良好的饮食习惯和卫生习惯；　挑战［Ｊ】．广州医药，２０１０，４１（３）：１－２．　【４］刘云志，赵秋峰，杨金生，等．人兽共患病的流行现状及其　以正确的方法饲养宠物，定期给宠物体检、打疫　防控措施『Ｊ］．上海畜牧兽医通讯，２０１１，（５）：７５—７５，　苗；爱护生态环境，提高自身素质。　藉百　丽　Ｈｕｎａｎ　Ａｎｉｍａｌ　ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏ．４，２０１３．（Ｔｏｔａｌ　Ｎｏ．１７６）　５　

Ｍ南　放兽廛　检测讨论复合Ｖ　对水牛精液冷冻的影响。　１材料与方法　１．１试验材料　２０１３年第４期（总第１７６期）　复苏８ｈ后，３ｍＬ／１００ｍＬ的复合Ｖ　组复苏后０ｈ精　子活力显著高于０ｍＬ／１００ｍＬ组（Ｐ＜０．０５）。　表１　不同浓度的复合７ｅ对精子解冻后活力的影响　试验材料是由湖南省光大牧业种公牛站提供　的摩拉水牛的新鲜精液作为试验材料。　１．２试验方法　１．２．１精液采集与稀释　精液采集后立即进行品质评定，畸形率低于　１５％才能进行后续试验。精液采精后在试管中进行　平衡，后迅速用于实验。取２０　Ｌ精液样本进行稀　释，活率高于６０％的精液样本才可用于冻精的制　作生产。　精液稀释采用一步稀释法。对检测密度和活　率合格后的鲜精进行稀释。处理过程中一般将精　液密度保持在１．５　２．０×１０８／ｍＬ左右。　１．２．２精液的降温与平衡　将处理好的样本放入盛有３５℃的水浴容器　中，平衡后转移到４～５℃的冰箱中降温。降温速度　控制在２～４ｈ内从３５℃降到５℃。在降温的这段　时间里，也是渗透性抗冻剂逐步降温和平衡的过　程　。　注：列内不同肩标字母的数据差异显著（Ｐ＜０．０５）。　２．２复合Ｖ　对精子顶体、质膜和ＤＮＡ完整性的　影响　稀释液中加入了３ｍＬ／１００ｍＬ的复合ｖ　组　的精子顶体完整性显著高于０ｍＬ／１００ｍＬ组　（Ｐ＜０．０５），各组的精子顶体完整率无显著差异　（Ｐ＞０．０５）。质膜完整性和ＤＮＡ完整性各组差异不　显著（Ｐ＞０．０５）。　表２不同浓度的复合Ｖｅ对精子解冻后质量的影响　１．２．３精液的分装和冷冻　精液充分平衡后，在细管型精液分装机中将　精液中进行分装、封口和打印。将分装后的细管水　平放置在冷冻架上。然后放入喷氮式冷冻箱中进　行冷冻处理。本试验采用法国卡苏全自动精液冷　冻仪进行降温冷冻处理。细管从５ｃｃ降到一１４５℃　左右。再将冷冻好的细管从冷冻仪中取出，快速放　人盛有液氮的液氮罐中保存。　１．２．４冻精的解冻和常规检测　将冻精从液氮罐中取出，立即放入３８℃的水　浴锅中解冻。加热２０ｓ后取出细管，将细管精液转　移至离心管中。用移液枪随机吸取８～１０　Ｌ精液　样本滴在载玻片上，盖好盖玻片，用精子图象分析　系统ＣＥＲＯＳ检测并记录精子活率　。剩余精液样　品用考马斯亮蓝Ｒ２５０染色、涂片，检测精子顶体　完整率。同时进行低渗膨胀试验（ＨＯＳＴ试验）检测　精子质膜完整性和吖啶橙诱发荧光试验　（ＡＯ—Ｔｅｓｔ）检测精子染色质ＤＮＡ完整性ｌ　７Ｉ。　２试验结果与分析　注：列内不同肩标字母的数据差异显著（Ｐ＜０．０５）。　３讨论　现在大多采用与黄牛相同的精液冷冻稀释液　配方用于水牛的精液冷冻保存。但在精液的理化　性质方面，水牛与黄牛还是存在较大差别，水牛的　精液中有较多的抑制精子活力的因子。因此在同　样的冷冻过程中，水牛精液的冷冻效果要差于黄　２．１复合Ｖ　对精子活力的影响　稀释液中加入了３ｍＬ／１００ｍＬ的复合ＶＢ组，　复苏后０ｈ精子活力显著高于０ｍＬ／１００ｍＬ组　（Ｐ＜０．０５）；复苏４ｈ各组活率差异不显著（Ｐ＞０．０５）。　６　牛。主要表现在水牛精子受损伤的程度较高，在低　温冷冻过程精子顶体膜的损伤会导致顶体酶外　渗，从而影响精子的受精能力　叫。　精子生物形态学分析是检测公畜生殖系统最　有效的技术方法。它能够对精子生物学功能进行　评估，筛查公畜不育的原因；对人工授精、体外受　精过程中使用的精子样本提供可靠的技术质量参　Ｈｕｎａｎ　Ａｎｉｍａｌ　ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏ．４，２０１３．（Ｔｏｔａｌ　Ｎｏ．１７６）　

．叫南亩放房廛　ｄｏｉ：ｌ０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－４９０７．２０１３．０４．００４　２０１３年第４期（总第１７６期）　长沙地区有钩柱花草引种试验初探　李雄，蔡文杰，李彩军　（湖南省畜牧兽医研究所，长沙４１０１３１）　摘　要　为研究有钩柱花草（ＳｔｙｌｏｓａｎｔｈｗｓｈａｍａｔａＣＶ．Ｖｅｒａｎｏ）在长沙地区的生长适应情况，文章对有钩柱花草的试种引　种进行了试验和分析。通过对有钩柱花草的生物学表现观察和营养成分分析，结果表明柱花草产量较高，营　养品质优良，抗逆性较强，可作为湖南地区豆科牧草推广品种。　关键词　有钩柱花草；引种；营养成分　中图分类号：Ｓ５４１．９　文献标识码：Ａ　文章标号：１　００６—４９０７（２０１　３）０４—０００７—０４　１前言　柱花草属植物是比较理想替代饲料资源，它　们属旱生植物，能够在许多粮食作物不能利用的　坡地种植，不会占用耕地。抗旱性强，其根瘤可以　固氮，能改良土壤，在酸性贫瘠土壤上也能生长，　考数据；同时在家畜遗传育种、繁殖新技术应用与　推广方面提供可靠的参考数据。　在本实验室前期试验中，证实了在水牛冷冻　种植管理比较粗放，可与其他经济作物间种、套种　和轮作。在利用方面，既可以直接喂养畜禽，也可　打制干草粉用于配合饲料，还可作为绿肥覆盖用　于经济作物。在营养方面，其粗蛋白含量超过稻谷　和玉米。因此重视和加强柱花草属植物的引种及　ａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｓｅｍｅｎ　ａｎｄ　ｆｅｒｔｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｆｒｏｚｅｎ　ｓｅｍｅｎ　ｐａｃｋａｇｅｄ　ｉｎ　ｍｉｎｉ　ａｎｄ　ｍｅｄｉｕｍ　Ｆｒｅｎｃｈ　ｓ￣ａｗｓＯ］．Ｒｅｃｅｎｔ　Ａｄｖａｎｃｅｓ　Ｉｎ　Ｂｕｆｆａｌｏ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９９０，（３）：８７－８８．　精液稀释液中分别添加Ｖ眦、复合Ｖ　和Ｖ　，可以　起到提高精子复苏后质量的作用［１１】。而在本研究　中，我们利用低渗膨胀（ＨＯＳＴ试验）和吖啶橙诱发　荧光（ＡＯ—Ｔｅｓｔ）两种检测方法，在检测精子质膜完　整性和精子染色质ＤＮＡ完整性同时，结合顶体完　整性检测数据，进一步检测讨论复合Ｖ　对水牛精　【５】Ｍａｅｓ，ＤＧＤ，Ｍａｔｅｕｓｅｎ　Ｂ，Ｒｉｊｓｓｅｔａｅｒｅ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｍｏｔｉｌｉｔｙ　ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ　ｏｆ　ｂｏａｒ　ｓｐｅｒｍａｔｏｚｏａ　ａｆｔｅｒ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ　Ｆ２ａ．Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ叨２００３，６Ｑ　１４３５－－１４４３．　【６】Ｒｉｊｓｓｅｌａｅｒｅ　Ｔ，Ｖａｎ　Ｓｏｏｍ　Ａ，Ｍａｅｓ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｅｃｈｎｉｃａｌ　ｓｅｔｔｉｎｇｓ　ｏｎ　ｃａｎｉｎｅ　ｓｅｍｅｎ　ｍｏｔｉｌｉｔｙ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｈａｍｉｈｏｎ－ｔｈｏｍｅ　ａｎａｌｙｚｅｒ［Ｊ］．　Ｔｈｅｒｉｏｇｅｎｏｌｏｇｙ．２００３，６０：１５５３－１５６８．　液冷冻的影响。进行。进行检测。本试验结果表明，　在精液冷冻稀释液种添加一定量的复合Ｖ　能够　提高水牛精液冷冻复苏后的活力和顶体完整性。　口　［７】李晟，易康乐，燕海峰，等．猪精液冷冻保护剂研究进　展［Ｊ］．家畜生态学报．２０１２，３３（５）：１１２－１１６．　【８】王丕建主编．王丕建论文集【Ｍ】．南宁：广西科学技术出　版社，１９９６．　【９］Ｗａｈｅｅｄ　Ｓ，Ａｈｍａｄ　Ｎ，Ｎａｊｉｂ－ｕｒ－Ｒａｈｍａｎ，ｅｔ　ａ１．　参考文献：　Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｄｕｃｋ　ｅｇｇ　ｙｏｌｋ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　［１］易康乐．水牛冷冻精液稀释液配方改进的研究【Ｄ】．广　西大学：南宁，２００５．　［２】Ｔａｌｅｖｉ　Ｒ，Ｐｅｌｏｓｉ　Ｓ，Ｓａｎｓｏｎｅ　Ｇ，ｅｔ　ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｒｅ—ｆｒｅｅｚｉｎｇ　ｒａｔｅｓ　ｏｎ　ｂｕｆｆａｌｏ　ｓｐｅｒｍ．Ｍｏｔｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　Ｎｉｌｉ—Ｒａｖｉ　ｂｕｆｆａｌｏ　ｂｕｌｌ　ｓｅｍｅｎ叨．Ａｎｉｍ　Ｒｅｐｒｏｄ　Ｓｃｉ．２０１２，　１３ｌ（１—２）：９５～９９．　【１０】Ｋｕｍａｒ　Ｒ，Ａｔｒｅｊａ　ＳＫ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｄｄｉｔｉｖｅｓ　ｉｎ　ｔｒｉｓ－ｂａｓｅｄ　ｅｇｇ　ｙｏｌｋ　ｅｘｔｅｎｄｅｒ　ｏｎ　ｂｕｆｆｌａｏ（Ｂｕｂａｌｕｓ　ｂｕｂａｌｉ￣　ｓｐｅｒｍ　ｔｙｍｓｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｅｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ叨．　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ．Ｂｕｆｆａｌｏ【Ｊ】．１９９４（３）：５３７－５３９．　【３】Ｓｉｎｇｈ　ＮＰ，Ｍａｎｉｋ　ＲＳ，Ｒａｉｎａ　ＶＳ，ｅｔ　１．Ｅｆａｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｙｓｔｅｉｎｅ　ｆｏｒｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃｒｙｏｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｕｆｆａｌｏ　ｓｅｍｅｎ　ｉｎ　Ｒｅｐｒｏｄ　Ｄｏｍｅｓｔ　Ａｎｉｍ．２０１２，４７（３）：４８５－４９０．　【１１】易康乐，刘锐鑫，黄卫红，等．几种维生素对水牛精液　冷冻的试验［Ｊ１．中国畜禽种业，２００９，（８）：５５～５７．　ｍｉｌｋ－ｗｈｅｙ　ｅｘｔｅｎｄｅｒｓ［Ｊ］．Ｒｅｃｅｎｔ　Ａｄｖａｎｃｅｓ　Ｉｎ　Ｂｕｆｆａｌｏ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ．１９９０，（３）：８９￣９３．　【４】Ｈａｒａｎａｔｈ　ＧＢ，Ｓｕｒｙａｐｒａｋａｓａｍ　ＴＢ，Ｒａｏ　ＡＶＮ，ｅｔ　ａ１．Ｆｒｅｅｚ　磊可　Ｔ　。０。—５一－０９　７　Ｈｕｎａｎ　Ａｎｉｍａｌ　ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎｏ．４，２０１３．（Ｔｏｔｌａ　Ｎｏ．１７６）