2024年3月16日发(作者：oppor15现价多少钱)

182

JoumalofPharmaceuticalPracticeVol.262008No.3

甲硝唑羧甲基壳聚糖缓释微球的制备及体外释放

11122

康现武

,

王　强

,

王　毅

,

顾其胜

,

蒋丽霞

(

1.

第二军医大学长征医院普通外科

,

上海

200003;2.

其胜生物材料技术

研究所

,

上海

201106

)

摘要　目的

:

探讨乳化交联法制备甲硝唑羧甲基壳聚糖微球的最佳工艺

,

并了解微球体外释药规律。方法

:

按正交设计

,

考察不同羧甲基壳聚糖浓度、投药比、交联度、乳化转速等条件对质量指标的影响

,

选出最佳方

案

,

并进一步检测微球的体外释放特性。结果

:

各因素对所制微球综合评分指标的影响大小依次为

:

乳化转

速

>

投药比

>

交联度

>

羧甲基壳聚糖浓度

,

用优化的工艺制得微球

50

～

200

μ

m

粒径分布百分数为

48

1

86%,

载药量为

48

1

19%,

包封率为

37.46%,

在

pH1.2

、

6

1

8

和

7

1

6,3

种缓冲液中的释放时间为

6

～

8h

。结

论

:

本法所制微球工艺稳定

,

在体外具有缓释作用。

关键词　甲硝唑

;

羧甲基壳聚糖

;

微球

;

体外释放

中图分类号

:R943,R944.9

　文献标识码

:A

　　　文章编号

:1006-0111

(

2008

)

03-0182-03

Preparationtechnologyand

in

2

vitro

releasecharacteristicsofmetronidazole

2

load

2

edcarboxymethylchitosansustained

2

releasemicrospheres

11122

KANGXian

2

wu,WANGQiang,WANGYi,GUQi

2

sheng,JIANGLi

2

xia

(

mentofGeneralSurgery,ChangzhengHospital,

SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200003,China;gBiomaterialTechnologicalInstitute,Shanghai201106,China

)

ABSTRACT

　

Objective:Tostudytheoptimumtechnologyforpreparingmetronidazole

2

loadedcarboxymethylchitosan

(

MZ

2

CMC

)

microspheresbyemulsificationandcross

2

linkingprocessandtoinvestigatethe

in

2

vitro

releasecharacteristicsofMZ

2

CMCmicrospheres.

Methods:Anorthogonaltest,basedon4factorsincludingCMCconcentration,MZ/CMC

(

W/W

)

,glutaradehyde/CMC

(

W/W

)

and

agitationspeed,wase

invitro

releasebehaviorwasre

2

s:Forthis4factors,thedegreeofinfluenceonthequalityofmicrospheresweregraduallylowerinthese

2

quenceof

“

agitationspeed

”

,

“

MZ/CMC

(

W/W

)

”

,

“

glutaradehyde/CMC

(

W/W

)

”

,and

“

CMCconcentration

”

.Preparedwithopti

2

mizedmethodinthistest,theproportionofmicrosphereswithdiameterfrom50

～

200

μ

mwas48.86%.Thedrugcontentwas48.

19%,andtheenvelopingratewas37.46%.The

invirto

releasetimewasfrom6

～

8hin3typesofbuffersolutionofpH1

1

2,6

1

8and

7

1

sion:ThepreparingtechnologyforMZ

2

CMCmicrospheresusedinthistestisdependable,andtheinvitroreleaseofMZ

fromthemicrospheresissustained.

KEYWORDS

　

metronidazole;carboxymethylchitosan;microsphere;

invitro

release

　　甲硝唑

(

metronidazole,MZ

)

是硝基咪唑类抗生

素

,

具有良好的抗厌氧菌、抗阿米巴作用

,

是溃疡型

结肠炎、

Crohn

病、肠阿米巴病等疾病及结肠术前肠

道准备的常用药物。甲硝唑口服后很快吸收

,

主要

通过血液循环到达病变部位

,

但存在局部药物浓度

较低、全身副作用较重等缺点。将甲硝唑制成缓释

制剂

,

可增加局部的药物浓度

,

延长药物的作用时

间

,

同时可减少药物的吸收

,

降低血药浓度

,

减轻全

身副作用

,

增加患者的耐受性。羧甲基壳聚糖

(

car

2

boxymethylchitosan,CMC

)

是壳聚糖羧甲基化的产

物

,

乳化交联后具有较好的缓释性能。本实验以

作者简介

:

康现武

(

1974

2

)

,

男

,

硕士生

.E

2

mail:kxw2046@.

通讯作者

:

王毅1

E

2

mail:wyirex@.

MZ

为药物模型

,

以

CMC

为药物辅料

,

乳化交联法

制备甲硝唑羧甲基壳聚糖

(

MZ

2

CMC

)

微球

,

并考察

微球体在不同缓冲溶液中的缓释情况。

1

　材料与方法

1.1

　药品与仪器

1.1.1

　药品与试剂　羧甲基壳聚糖

(

CMC,

批号

:

20070602,

动力粘度

:2000mPa

・

s,

羧甲基取代度

:

90%

)

,

上海其胜生物制剂有限公司赠送

;

甲硝唑

(

MZ,

批号

:07022801,

药用级

)

,

购于上海邦成化工有限公司

;

液体石蜡、石油醚、丙酮、司盘2

80

、

25%

戊二醛

(

GD

)

等

为分析纯或化学纯

,

购于上海化学试剂商店。

1.1.2

　仪器　电动搅拌机

(

上海申生科技有限公司

)

,

AL204

电子天平

(

Mettler

2

ToledoGroup

)

,UV

2

2102PC

型

药学实践杂志　

2008

年第

26

卷第

3

期

183

紫外可见光分光光度计

(

尤尼柯上海仪器有限公司

)

,

XSZ

2

107F

光学显微镜

(

浙江宁波光学仪器厂

)

,DZF

2

1B

型真空干燥箱

(

上海跃进医疗器械厂

)

。

1.2

　甲硝唑羧甲基壳聚糖微球的制备

1.2.1

　乳化交联法制备甲硝唑羧甲基壳聚糖微球

　在

25

℃下将甲硝唑均匀分散在羧甲基壳聚糖生

理盐水溶液中

,

加入含

1%

司盘2

80

的液体石蜡中

,

以一定速度搅拌

30min,

使之成为稳定的乳化体系

,

降温到

5

～

7

℃后

,

加入戊二醛交联固化

3h,

静置

,

倾弃油层

,

砂芯漏斗真空抽滤

,

分别用石油醚洗涤、

丙酮脱水

3

次

,

真空干燥箱干燥

48h,

即得载药微

球

,

称重记录。

1.2.2

　正交实验优化制备工艺　选定

CMC

浓度

(

A

)

、投药比

(

B

)

、交联度

(

C

)

、乳化转速

(

D

)

等

4

个

因素

,

各分

3

个水平

,

以微球的

50

～

200

μ

m

粒径分

布百分数

(

%

)(

E

)

、载药量

(

%

)(

F

)

、包封率

(

%

)

(

G

)

为评价指标

,

按

L

9

(

3

4

)

正交设计

,

优选出最佳

工艺条件。实验因素及水平见表

1

。

表

1

　正交因素及水平

因素

1

2

3

A:C

CMC

(

%,w/v

)

2

2.5

3

B:MZ/CMC

(

w/w

)

2

3

4

C:GD/CMC

(

w/w

)

1

2

3

D:

乳化转速

(

r/min

)

300

400

500

干态微球的形态及分散性

,

选择有代表性的区域

,

测

定

500

个粒子

,

计算

50

～

200

μ

m

粒径分布百分数。

1.3.5

　体外释放　根据中国药典

2005

年版

(

二

部

)

附录Ⅹ

C

第二法进行

,

温度

:

(

37.0

±

0.5

)

℃

,

转速

50r/min

。甲硝唑原料药

0.2g,

放入释放介质

pH1.2HCl

溶液中

2h;MZ

2

CMC

微球

(

0.2/

载药量

)

g,

分别放入释放介质

pH1.2HCl

溶液、

pH6.8

磷酸

盐缓冲液、

pH7.6

磷酸盐缓冲液各

12h

。间歇收集

释放液

5mL,

并补充等量释放介质。过滤后滴定至

中性

,

生理盐水定容

,

在波长

320nm

处测定光密度

值

,

由标准曲线方程计算出药物浓度

,

并计算药物累

计释放量及累积释放百分率。

2

　结果

　对于

载药微球

,

粒径分布百分数、载药量、包封率越高越

好

,

但直接相加减缺乏理论依据

,

参考相关文献

,

本

2.1

　

Z

2分综合评价法对多指标综合评价

[1]

实验采用

Z

2分综合评价法对多指标归一化处理

,

计

算公式如下

:Zi=

(

Xi-

X

i

)

/Si,Xi

为指标值

,

X

i

为

指标的平均值

,Si

为指标的标准差

,

∑

Zi=

∑

Zi

高

优

-

∑

Zi

低优。

正交实验结果及多项指标归一化结果见表

2

。

该表显示各因素对所制微球综合指标的影响大小依

次为

:D>B>C>A;

通过直观分析

,

最佳工艺组合

为

:A

2

B

3

C

2

D

2

,

即

:CMC

浓度

2.5%

、投药比

(

MZ/

CMC

)

4

、交联度

(

GD/CMC

)

2

、乳化转速

400r/min

。

2.2

　验证实验　根据最佳工艺

,

制备

6

批微球

,

肉

眼观微球呈小颗粒状

,

颜色微黄

;

光学显微镜下

,

见

微球粘连少

,

外观较圆整。微球

50

～

200

μ

m

粒径

分布百分数为

(

48

1

86

±

2

1

07

)

%,

载药量为

(

48

1

19

±

1

1

48

)

%,

包封率为

(

37

1

46

±

1

1

93

)

%,

综合评分

为

1

1

61,

为正交实验的最优结果。微球光学显微镜

照片见图

1,

微球粒径分布见图

2

。

2.3

　体外释放　累积释放度与时间关系如图

3

所

示。

MZ

原料药在

45min

内释放完毕

,

而

MZ

2

CMC

微球在

pH1.2HCl

溶液中

6h

后累积释放度

100%,

在

pH6.8

和

pH7.6

磷酸盐缓冲液中

8h

后累

积释放度

100%

。

3

　讨论

1.3

　微球有关指标的测定

1.3.1

　标准曲线　精密称取干燥恒重的

MZ

对照

品

10mg,

置于

100mL

容量瓶中

,

加生理盐水溶解

并定容

,

成为

0.1g/L

的标准储备液。取储备液加

生理盐水配成

12

μ

g/mL

的溶液

,

在紫外分光光度

计

320nm

处有最大吸收。同法配制

2

、

4

、

8

、

16

、

24

、

32

、

48

μ

g/mL

系列溶液

,

以生理盐水为空白

,

在

320

nm

处测定光密度

Y

。得标准曲线为

:

Y

=0

.

0537

X

+0

.

0264

(

X

:

μ

g/mL

)

,

r

=0.9998

1.3.2

　载药量　取微球少许充分研磨

,

称量

50mg

加

入

1mol/LHCl

溶液

20mL

中

,

沸水浴

15min,

微球完

全消解后用

NaOH

滴定至中性

,

用生理盐水稀释定容

于

100mL

容量瓶中

,

取其上清液

3mL

过滤后用生理

盐水定容于

25mL

容量瓶中

,

在紫外分光光度计

320

nm

处测定光密度

Y

值

,

根据标准曲线计算出药物浓度

μ

g/mL

)

,

得微球载药量为

:

载药量

=

(

X

×

X

(

25

×

100

)

/

(

3

×

50

×

1000

)

×

100

%

=

X

/60

×

100%

。

微球是近些年药物新剂型研究的一个热点

,

是

以大分子材料为基质

,

通过物理或化学方法

,

形成的

球型实体。微球体中药物的释放速率与药物在释放

介质中的溶解度、药物在微球体中所处的物理状态、

药物与微球的亲和力等因素有关。

1.3.3

　包封率　根据微球的重量及微球的载药量

,

可计算出包封率

:

包封率

=

载药量×微球的重量

/

投

入的总药量×

100%

。

1.3.4

　粒径分布　用带测微尺的光学显微镜观察

184

表

2

　正交设计及结果

NO.

1

2

3

4

5

6

7

8

9

K1

K2

K3

Kmax

2

Kmin

A

1

1

1

2

2

2

3

3

3

-1.00

0.62

0.37

1.62

B

1

2

3

1

2

3

1

2

3

-1.84

0.90

0.93

2.77

C

1

2

3

2

3

1

3

1

2

-1.08

0.66

0.41

1.74

D

1

2

3

3

1

2

2

3

1

0.34

3.18

-3.53

6.71

JoumalofPharmaceuticalPracticeVol.262008No.3

E

78.20

80.14

93.10

75.00

23.40

45.36

28.67

27.20

22.45

F

26.12

45.06

31.42

22.52

48.70

48.45

39.23

39.22

52.60

G

20.90

26.29

12.80

23.42

36.75

34.11

42.76

26.58

33.75

Z

2

score

-1.19

1.25

-1.06

-1.36

0.76

1.22

0.71

-1.11

0.77

结肠靶向性

,

分析原因为

:

①微球表面及靠近微球表

面的药物晶体和分子扩散到介质中

,

形成突释

;

②

MZ

主要以晶体的形式分散在微球中

,

相对于分子形式

,

晶体颗粒较大

,

降低了

CMC

交联的致密性

;

③戊二醛

交联是一个瞬间反应

,

有报道用戊二醛饱和的甲苯溶

[5]

液可降低反应速度

,

得到坚硬结实的球体

,

本实验

降低了反应温度

,

以期降低反应速度

,

但仍可能交联

过快

,

致使微球的密度较低。

[6]

用

EXCEL

软件对溶出数据进行曲线拟合

,

2

微球在三种缓释液中的前

2h,

符合线性关系

(

R

>

0

1

99

)

,

为零级方程释药

;

对所有数据分析

,

用线性、

对数、指数、乘幂、

Weibull

分布等拟合

,Weibull

分布

2

的拟合效果最佳

(

R

>0

1

99

)

。同

MZ

原料药比较

,

MZ

2

CMC

微球在

pH1

1

2

、

6

1

8

和

7

1

6,3

种缓冲液中

,

均有明显的缓释作用。

参考文献

:

[1]

　赵应征

,

鲁翠涛

,

梅兴国

.

常用多指标综合评价法在优选实验

中的应用

[J].

医学研究生学报

,2004,17

(

7

)

:624.

[2]

　沈宏亮

,

王　强

,

钱　方

,

等

.

左氧氟沙星羧甲基壳聚糖缓释

微球的制备及其体外释放研究

[J].

第二军大学学报

,2004,

25

(

5

)

:482.

[3]JameelaSR,aldehydecross

2

linkedchi

2

tosanmicrospheresasalongactingbiodegradabledrugdelivery

vehicle:studiesonthe

invitro

releaseofmitoxantroneand

invivo

degradationofmicrospheresinratmuscle[J].Biomaterials,

1995,16

(

10

)

:769.

[4]

　

BertholdA,CremerK,nceofcrosslinkingon

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2

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[5]

　张艳华

,

魏玉辉

,

刘志红

,

等

.

苦参碱壳聚糖微球的制备及体

　　用醛交联的壳聚糖微球

,

可减缓药物的释放

,

[4]

增加对胃酸的耐受性

,

表现为结肠靶向性。本实验

制备的微球

,

在

pH1.2HCl

溶液有较多释放

,

不具有

[2

、

3]

外释药

[J].

中国医院药学杂志

,2006;26

(

3

)

:307.

[6]

　王志强

,

吴继禹

,

张秀华

.

用

Excel

软件对溶出数据进行多种

曲线拟合和处理

[J].

海峡药学

,2006,18

(

1

)

:47.

收稿日期

:2008

2

02

2

28