2024年5月13日发(作者：破解qq空间访问权限2021)

中国生物工程杂志

China Biotechnology

，

2021，41 (5 ) :27-34

DOI

：

10. 13523/. 2102025

新型冠状病毒胶体金抗原快速检测试剂的

研制及性能评价*

张赛1王刚1刘仲明2李辉军3汪大明4钱纯亘

(1

深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司深圳

518116 2

中国人民解放军南部战区总医院广州

510010)

(3

华中科技大学同济医学院附属同济医院武汉

430030 4

中国科学院苏州生物医学工程技术研究所苏州

215163)

(5

华中科技大学生命科学与技术学院武汉

430074)

摘要目的：建立新型冠状病毒（

severe

acute

respiratory

syndrome

coronavirus

2，

SARS

-

CoV

-2 )股体

金抗原快速检测试剂的制备方法，并对检测试剂的性能指标进行评价。方法：采用柠檬酸三钠还

原法制备股体金溶液，用鼠抗核衣壳蛋白

（nucleocapsid

protein

,

N

血清白蛋白（

DN

兔抗

DNP

P

-

BSA

P

)单克隆抗体及二硝基苯紛-牛

)作为标记抗体，硝酸纤维素膜上分别包被鼠抗核衣壳蛋白单克隆抗体和

多抗作为检测线和质控线制备免疫肢体金试纸条；对试剂最低检出限、交叉反应性、加

速稳定性及临床诊断特异性和灵敏度进行性能评价。结果：检测热灭活培养物的最低检出限为

2.0

x

102

TCID

5()/

mL

;测试16种常见呼吸道病原体高浓度样本均无交叉反应；试剂盒50

T

；加速破

坏8周稳定。临床及健康人群鼻咽拭子样本测试，诊断灵敏度为96. 67% (29/30)

，

特异性为

99.23% (129/130)

，

总符合率为 98. 75% (158/160);—致性检验

Kappa

值为 0. 959 0, <0. 05。

结论:

SARS

-

C

〇

V

-2股体金抗原快速检测试剂检测灵敏度和特异性高，检测速度快，操作便携，无需

设备，肉眼观察，可作为现有核酸检测法的补充手段，用于新型冠状病毒的早期筛查。

关键词新型冠状病毒抗原股体金免疫层析性能评价

中图分类号

Q

816

新型冠状病毒

（

SARS-C

〇

V-2)

是正链单股

RNA

病

毒,是已知基因组最大的

RNA

确诊病例诊断的“金标准”是病毒核酸的检出，不过

，

受样本类型、样本质量和检测技术等方面因素限制，基

于核酸的检测存在一定程度“假阴性”，对检测人员及

设备要求较高，检测时间也较长,这些给临床诊断和疫

情防控带来较大困难。研究显示感染

SARS

-

CoV

-2

后，人体会在约7

d

产生针对病毒的免疫球蛋白

M

(immunoglobulin

M

病毒之一，有包膜，属冠

状病毒科。该科分为

a

、

(3、S

和

7

四个属，

SARS-C

〇

V-2

属于

P

属，可引起新型冠状病毒性肺炎

（

C0VID-

19)

m

。美国约翰霍普金斯大学数字显示，截至2021

年

1

月

26

日全球新冠肺炎累计确诊病例已经超过

1

亿

例，病毒肆虐

192

个国家或地区，累计超过

214

万人死

亡。目前新型冠状病毒检测技术主要有分子诊断的荧

光定量

PCR

技术（

RT-PCR)

[23]、基因测序技术[4—5]、基

因编辑技术[6_7]及免疫学检测的免疫层析法[8'9]、化学

发光法[HM1:和酶联免疫吸附

ELISA

法~]。

C0VID-19

收稿日期

:20214)2-22

修回日期

:2021>0442

，

IgM

)抗体，约

I

4

d

会产生病毒的免

疫球蛋白

G

(

immunoglobulin

G

，

IgG

)抗体14]，可见基于

免疫学的抗体检测对于病毒的早期筛查并不适用，但

在回顾性流行病学调查上具有重要意义。在实际诊断

过程中，抗体检测法也暴露出较多的假阳性问题#16]，

不能单独作为诊断指标用于筛查，只能作为当核酸检

测为阴性时的辅助诊断方法。由于核酸检测和抗体检

测在诊断中所暴露出的问题，除

CT

*

深圳市科技创新委员会

“

新型冠状病毒肺炎疫情应急防治”悬赏

项目（

2020254008

)、深圳市龙岗区科技发展资金“新型冠状病毒感

染应急防治”科技专项（

LGKCXGZX2020012)

资助项目

**通讯作者，电子信箱：〇(1111^611_9丨3[1@111|81.6(111.(；11

等临床症状指标

外，临床医生急需一种能够快速诊断

C

0

VID

-19的方

28

中国生物工程杂志

China BiotechnologyVol.41 No. 5 2021

L

法，能够实现对人群的大规模筛查。基于免疫学的抗

原快速检测技术采用双抗体夹心法，可有效提高免疫

学方法的特异性,减少假阳性的发生；同时抗原检测速

度快，检测一个样本仅需10〜20

min

,可以做到现场快

检，操作简便，无需特殊设备和人员培训；由于抗原蛋

白较稳定，相对于核酸检测技术抗原检测对样本的要

求也相对较低:17"9]。目前国内外已上市的抗原快速检

测试剂大多具有较高的特异性，但检测灵敏度不同厂

1.2.2胶体金标记偶合物的制备分别取100

m

体金至两个干净的烧杯中，按照优化的标记

p

分别加人0. 1

tnol

/

L

碳酸钾3. 3

m

pH

N

L

H

L

胶

条件，

调整 和2. 1

m

,磁力搅拌器300

r

/

min

搅拌10

niin

,分别加人鼠抗

SA

蛋白单克隆抗体和

DNP

-

B

蛋白各

I

mg

，搅拌15

Lmin

;分别加入10%

BSA

溶液2

m

，继续搅拌20

min

;

L

搅拌结束后，将胶体金溶液转移至两支50

m

离心管

中，设置离心机参数为9 000

r

/

min

、20

min

、4尤，进行离

家差

异较大

（

30. 2%

〜

93.9%) [9〃°]

，检测灵敏度偏低

与样本病毒载量及试剂盒质量均有关系。本研究采用

胶体金免疫层析双抗体夹心法研制

SARS-CoV-2 N

蛋

白抗原快速检测试剂盒，并对试剂盒的性能指标进行

了系统的验证，以评估试剂盒在快速诊断

C0VID-19

的

价值。

1材料与方法

1.1材料与试剂

1.1.1

样本来源在美国

PacGenomics

临床遗传学实

验室进行临床评估，用

DiaCarta

公司

QuantiVirus™

核酸

检测系统及本研究所制备的抗原检测试剂盒同时取鼻

咽拭子样本进行比对测试，其中核酸阳性

30

例，核酸

阴性

30

例;另外从本公司员工（健康人群）中采集

110

例鼻咽拭子样本进行特异性检测。

1.1.2 主要试剂氯金酸、柠檬酸三钠、碳酸钾、

Nonidet

P

40(

NP

40

)、Proclin

300 购自

Sigma

公司（美

国）；牛血清白蛋白购自

Proliant

公司（新西兰）；海藻

糖、吐温20、氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾

购自国药集团化学试剂有限公司（上海）；玻璃纤维素

膜、硝酸纤维素膜购自

Merck

公司（德国）；吸水纸、

PVC

板购自金标生物科技有限公司（上海）；配对鼠抗

N

蛋白单克隆抗体购自菲鹏生物有限公司（东莞）；

UNP

-

BSA

、兔抗

DNP

多抗购自佰桥瑞景生物科技有限

公司（北京）；

SARS

-

C

〇

V

-2质控品为深圳市亚辉龙生物

科技股份有限公司自产;其他试剂均为国产分析纯。

1.2方法

1.2.1胶体金溶液的制备采用柠檬酸三钠还原法

制备胶体金溶液。取1 〇〇〇

mL

超纯水于磁力搅拌器上

加热至沸腾，加人1 %氯金酸溶液40

mL

,当溶液再次沸

腾后，迅速加人1%的柠檬酸三钠溶液36

mL

，当溶液颜

色变为紫色后继续煮沸5

min

,关闭加热器，冷却后用

超纯水恢复到原体积。用纳米粒度仪测定胶体金颗粒

的均直径及

Zeta

电位，室温避光保存。

心。离心结束后，小心取出离心管，切勿晃动，用移液

器吸走上清液，收集沉淀，用偶合物稀释液复溶至10

mL

，4<

C

避光保存。用纳米粒度仪测定胶体金偶合物颗

粒的均直径及

Zeta

电位。

1.2.3抗原检测试纸条的制备用样本垫处理液将

样本垫涂布处理均匀，每张玻纤涂布量为30

mL

，50

t

烘干24

h

。用偶合物稀释液稀释胶体金标记鼠抗

N

蛋

白单克隆抗体和胶体金标记

UNP

-

BSA

蛋白偶合物，体

积占比分别为18%和20% ,用稀释好的胶体金偶合物

处理液将偶合物垫涂布处理均匀，每张玻纤涂布量为

30

mLJSt

干燥 24

h

。用含 0. 01

mol/L

pH

7.4 的

PBS

,5%海藻糖的包被液分别稀释鼠抗

N

蛋白单克隆

抗体和兔抗

DNP

多抗浓度为2. 0

mg

/

mL

和1.0

mg

/

mL

,分别作为检测线（

T

线）和质控线（

C

线）捕获抗体

包被在硝酸纤维膜（

NC

膜）上,45

T

烘干48

h

。将制备

好的

NC

膜、偶合物垫、样本垫及吸水垫依次黏贴在

PVC

底板上，用切条机裁切为3

mm

/条，装人卡壳，铝

箔袋封装。

测试时将鼻咽拭子插人预装有提取液（10

mmol/L

PBS,PH

7.4,1%

NP

40)的提管中，抽提15

s

后滴加3

滴（100

W

.)至检测卡加样孔，反应15

min

后进行肉眼

判读。

T

线、

C

线均显色为阳性，

T

线不显色、

C

线显色

为阴性,

C

线不显色表明试纸条生效，需重新测试。试

纸条结构示意图如图1所示。

样本垫

偶合物垫

吸水垫

图1抗原检测试纸条结构图

Fig. 1 Structure chart of test strip for

antigen detection

2021,41(5)

张赛等:新型冠状病毒胶体金抗原快速检测试剂的研制及性能评价

29

1.2.4最低检出限用热灭活病毒培养物（

ATCC

,货

号

VR

本进行临床比对测试，其中

PCR

阳性30例、

PCR

阴性

30例;用同一批试剂卡对本公司采集的110例健康人

群鼻咽拭子样本进行检测。使用

IBM

SPSS

20.0软件

对数据进行统计分析，采用

Kappa

检验,统计分析所研

制的新型冠状病毒胶体金抗原检测试剂的临床性能。

-1986

HKTM

,批号 70036071，浓度 1. 6

x

105

TClD

5()/

mL

)进行最低检出限研究。选用健康人群鼻咽

拭子洗脱液作为阴性基质，先10倍梯度稀释,测试出

现阴性结果后从上一浓度再2倍梯度稀释，选择20次

测试中不低于19次阳性的浓度水平（英95%)作为试

剂的最低检出限。

i

.

2

结果

2.5交叉反应分析本实验室收集的肺炎支原体、

2.1胶体金及胶体金偶合物粒径和

Zeta

电位分析

采用动态光散射法（

DLS

)表征未标记胶体金及胶

体金偶合物的粒径大小及光强分布[21]，结果如表

I

和

图2所示，制备的胶体金平均直径（54. 71 ±0. 51 )

nm

肺炎衣原体、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血

杆菌、冠状病毒

OC

43、冠状病毒229

E

、冠状病毒

NL

63、

甲型

H

1

N

1流感病毒、甲型

H

3

N

2流感病毒、新型甲型

H

,

1

N

1流感病毒（2009)、乙型流感

Victoria

、乙型流感

型、呼吸道合胞病毒

B

分布系数

PDI

为0. 17 ±0.00,胶体溶液体系分散度较

好，表明所制备的胶体金粒径均一，尺寸分布较窄。

Zeta

电位是表征胶体分散系稳定性的重要指标，体系

Yamagata

、呼吸道合胞病毒

A

型、腺病毒3型共计16种呼吸道病原体高浓度毒株进

行交叉反应测试，每个病原体测试1次，观察

T

线和

C

线条带显色情况。

1.2.6 稳定性测试将制备好的成品试剂卡置于

50

T

烘箱中，每隔两周用高、低两个浓度质控品进行测

试，每个样本重复测试3次，比较第2周、4周、6周、8

周高温加速破坏试剂与对照试剂（〇周）条带深浅的

差异。

1.2.7临床性能评价在美国

PacGenomics

临床遗传

学实验室用

DiaCarta

公司

QuantiVirus

IM核酸检测系统

及本研究所制备的抗原检测试剂盒同时取鼻咽拭子样

表

1

Table 1

稳定与否通常以

Zeta

电位是否大于±30

mV

为标

准;22!，本研究所制备的胶体金

Zeta

电位为（-32.70 ±

1.93 )

mV

,表明所制备的胶体金溶液稳定性较好。

从表1和图2中可以看出，鼠抗

N

蛋白单克隆抗

体和

DNP

-

BSA

蛋白标记后的胶体金与未标记胶体金

相比，粒径明显变大，但分布系数

PDI

仍较小，表明标

记后的偶合物体系分散度仍较好；与未标记胶体金相

比，鼠抗

N

蛋白单克隆抗体偶合物的

Zeta

电位明显增

加，可能是胶体金表面吸附的抗体蛋白也带负电荷，标

记后的抗体偶合物处于更加稳定的状态。

胶体金及胶体金偶合物粒径和

Zeta

电位

Particle size and zeta potential of colloidal gold and its coupling

Z-average ( c/) /nmPDI

0• 17 ±0.00

0.21 ±0.00

0.23 ±0.01

Zeta potential/mV

-32.70 ±1.93

41.07 ±0.81

-30.23 ±0. 14

未标记胶体金

鼠抗

N

蛋白抗体偶合物

54.71 ±0.51

81.16±0.48

77.29 ±1. 19DNP-BSA

蛋白偶合物

2.2最低检出限

序:23:及同类产品加速稳定性研究数据，该试剂盒效期预

热灭活病毒培养物梯度稀释测试，浓度为2.0

xlO

2

测可达到常温(251) 18个月。

TCIDw

/

mL

时，检测20次全部为阳性，故本研究所制备

2.4交叉反应

如表3所示，肺炎支原体、肺炎衣原体、肺炎链球

状病毒229

E

、冠状病毒

NL

63、甲型

H

流感病毒、甲

/

m

金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、冠状病毒

OC

43、冠

。不同浓度培养物试剂卡显色

菌、

IM

的抗原检测试剂盒检测热灭活病毒培养物的最低检出

限为2. 0

x

102

TCmwL

强度如图3所示。

2.3加速稳定性

型

H

3

N

2流感病毒、新型甲型

H

1

N

1流感病毒（2009)、乙

乙型流感

Yamagata

、呼吸道合胞病毒

A

50

T

加速稳定性测试结果如表2所示，高、低两个

型流感

Victoria

、

呼吸道合胞病毒

B

型、腺病毒3型共计16种呼吸道

浓度质控品，第〇周、2周、4周、6周、8周的

T

线和

C

线

型、

试剂盒

T

线显色条带均为阴

条带显色强度一致，表明所制备的抗原检测试剂在5〇丈

病原体高浓度毒株样本，

环境加速破坏8周稳定。根据

CLSI

加速稳定性评价程

性，无交叉反应，表明试剂的特异性较好。

30

中国生物工程杂志

China Biotechnology

Vol

.41

No

. 5 2021

Size (d) / nm

(a)

1 10 100

Size (d) / nm

1 000 10 000

(b)

图2胶体金及胶体金偶合物粒径分布图

Fig. 2 Particle size distribution of colloidal gold and its coupling

(a) Unlabeled colloidal gold ( b) Mouse anti - N protein antibody conjugate ( c) DNP - BSA protein conjugate

r

YHLO

QUHB-

，

r

YHLO

1

OLINE-

201»^iCoVAg

r

YHLO

-r ^

2

〇

1^^C

o

VA

q

» « ♦

GLtME-

YHLO

OLINE-

YHLO

OLINE-

201»

I

j

丨下

警

L

800 TCID^/mL

：(

4

V

/T

訾

JJ

L

400 TCID^/raL 200 TCID^/raL

J

.

L

A

100 TCID^/rnL 50 TCID^/raL

图3不同浓度灭活培养物的显色强度

Fig. 3 The color intensities of different concentrations of inactivated culture.

2021,41(5)

张赛等:新型冠状病毒胶体金抗原快速检测试剂的研制及性能评价

31

表

2

Table 2

对照（

0

周）

加速稳定性结果

The results of accelerated stability

2

周

4

周

6

周

8

周

T线

质控品1

1

2

3

C线

T线C线 T线 C线T线

C线 T线

C线

+

+

+

+ /-

+ /-

+ /-

+ +

+ +

+

+

+ +

+ +

+ +

+

+

+

+ /-

+ /-

+ /-

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+

+

+

+/-

+/-

+/-

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+

+

+

+ /-

+ /-

+ /-

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+

+

+

+/-

+/-

+/-

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

+ +

质控品

2

1

2

3

Note: “+ /-，’stands for weak positive,

+ ** stands for positive, and ** + + M stands for strong positive

表

3

交叉反应结果

Table 3 The results of cross reaction

序号

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

Note

：

u

病原体种类

肺炎支原体

肺炎衣原体

肺炎链球菌

金黄色葡萄球菌

流感嗜血杆菌

冠状病毒

OC43

冠状病毒

229E

冠状病毒

NL63

甲型

H1N1

流感病毒

甲型

H3N2

流感病毒

新型甲型

H1N1

流感病毒（

2009)

毒株号

ATCC 15531

ATCC VR-2282,TW-183

/

CMCC(B) 26003

GIM 1.961

ATCC VR-1558, OC43

ATCC VR-740,229E

BELRESOURCES NR470

A/PR/8/34(HlNl)

L8 - A3/Brisbane/10/2007

A/GZ/GIRD02/2009 (2009 H1N1)

L2-BV/Heilongjiang/l 16/2010

B/Guangzhou/GIRD06/09( Yamagata)

RSVA/Long

RSVB/GZ/Hecinl704-8

AD V3/GZ/0101/2011

浓度

/

4.2 xlO2 TCID50/mL

1.0 x 108 CFU/mL

3.0xl09 CFU/mL

/

1.8 x 105 TCID50/mL

5.6 xlO4 TCID50/mL

/

1.8 x 108 TCID50/mL

4. 2 xlO6 TCIDso/mL

106 25 TCID50/0. lmL

1.0 xlO5 TCIDso/mL

1.0 x 105 TCID

jo

/O. lmL

106 25 TCIDjo/mL

2.4xl06TCID50/mL

3.2 xlO8 TCID50/mL

测试结果

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

-

乙

型流感

Victoria

乙

型流感

Yamagata

呼吸道合胞病毒

A

型

呼吸道合胞病毒

B

型

腺病毒

3

型

-

stands for negative, no color band

2.5临床性能评价

美国

PacGenomics

临床遗传学实验室临床评估统

计结果如表4所示，与

RT

-

PCR

表

4

临床性能评价

Table 4 The results of clinical performance evaluation

RT-PCR

YHLO

抗原检测试剂

阳性

（+)

阳性

（+)

阴性

（-)

合计

阴性（•）

合计

检测结果比较，灵敏度

为 96.67% (29/30) ,95%

CI

:82.78% -99.92% ;特异

性为 100% (30/30) ,95%

CI

:88.43% ~ 100.00%。其

中1例漏检样本，

RT

-

PCR

29

1

30

0

30

30

29

31

60

测试

Ct

值为32. 15。

用同一批试剂卡对本公司采集的11〇例健康人群

鼻咽拭子样本进行检测，11〇例样本均未出现假阳性，

健康人群抗原检测特异性为1〇〇% (11〇/11〇)。将美国

PacGenomics

临床遗传学实验室及本公司测试的健康

人群样本合并统计，灵敏度为96. 67% (29/30) ,95%

CI

:82.78% ~ 99.92% ,特异性为 99. 23% (129/130)，

32

中国生物工程杂志

China BiotechnologyV

〇

1.41 No. 5 2021

95%

CI

:95.79% ~99.98%，总符合率为98.75%(158/

160),95%

CI

:95. 56% -99.85%;

Kappa

检验一致性

较好，

Kappa

值为0.959 0

，P

<0.05。试验结果表明，本

研究研制的新型冠状病毒抗原检测试剂盒灵敏度和特

异性良好，与临床诊断符合率较高，可作为新型冠状病

毒感染的有效筛查和诊断指标。

3

讨论

新型冠状病毒也称严重急性呼吸综合征（

SARS

)

冠状病毒2

,

与

SARS

冠状病毒一样，由

RNA

核酸和蛋

白质等组成,

RNA

容易降解，蛋白质衣壳将

RNA

包裹

在其中，加上一层由脂质和糖蛋白组成的包膜，从而使

RNA

得到保护[1]。病毒核酸检测是确诊感染的“金标

准”，但由于采样时间、部位，试剂质量，实验室质量管

理等因素的影响，病毒核酸检测的“假阴性”也就无法

完全避免。新型冠状病毒特异性

IgM

和

IgG

抗体检测

可以明确患者是否“近期或既往感染过新型冠状病

毒”，有助于核酸检测阴性但临床上疑似患者的确诊，

但感染病毒后人体内一般7

d

后才产生特异性抗体，且

抗体检测法也暴露出较多的假阳性问题。

本研究采用双抗体夹心胶体金免疫层析法制备

N

蛋白抗原快速检测试剂，可有效避免

RT

-

PCR

法的假阴

性和抗体检测法的假阳性问题，诊断快速、准确、无需

设备，人员要求低，非常适合大规模新型冠状病毒感染

疑似病例的快速排查，对疫情集中暴发的快速诊断非

常有效。也可以作为出院病例核酸检测的再次确诊方

法,避免假阴性患者出院造成新的传播风险。

Lambert-Niclot

等[24』采用比利时

Coris BioConcept

公司的胶体金法

C0VID-19

抗原检测试剂测试了

94

例

新冠病毒

RT-PCR

阳性鼻咽拭子样本，共检出抗原阳性

47

例，灵敏度仅

50%

,其中

Ct

值姿

25

样本的灵敏度为

82.2%

，

样本中病毒载量越高试剂灵敏度越高,试剂特

异性

100%

。

Nalumansi

等

[18]

用韩国

SD

公司胶体金法

C0VID-19

抗原检测试剂与

RT-PCR

同时检测

262

例鼻

拭子样本,结果灵敏度和特异性分别为

70%

和

92%

,其

中

Ct

值姿

29

样本的灵敏度为

92%

,同样样本中病毒载

量越高试剂灵敏度越高。本研究所制备的抗原快速检

测试剂盒，灵敏度为％.

67%

(

29/30

),特异性为

99. 23%

(

129/130)

，

其中

1

例漏检样本

Ct

值较高，说明

样本中病毒载量并不高，试剂灵敏度表现优异。本研

究测试了

16

种常见呼吸道病原体高浓度样本均无交

叉反应，试剂特异性较好。因开发时间有限，本试剂盒

实时稳定性会持续进行验证。研究发现，

C

0

V

1

D

-19感

染患者的唾液及尿液样本中同样可以检测出

N

蛋

白。本研究开发的试剂盒目前可用于检测鼻咽拭

子样本，取样时对人体有侵人性且容易使采集者暴露

在带病毒的气溶胶中，后期可将检测样本类型拓展到

唾液、尿液等标本上。

综上所述，本研究开发的新型冠状病毒（

SARS

-

C

〇

V

-2)抗原快速检测试剂（胶体金免疫层析法）具有便

捷、快速，及灵敏度和特异度高的优点。该新型冠状病

毒抗原检测产品可用于为疑似患者快速辅助诊断及重

点人群快速辅助排查，促进患者早期诊断与及时干预，

这对于新型冠状病毒感染的诊断和防控具有重要的

意义。

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N ucleocapsid_Protein.

34

中国生物工程杂志

China BiotechnologyV

〇

1.41 No. 5 2021

Development and Performance Evaluation of a Rapid Antigen Test for

SARS-CoV-2

ZHANG

Sai

1

WANG

Gang

1

LIU

Zhong

-

ming

2

LI

Hui

-

jun

3

WANG

Da

-

ming

4

QIAN

Chun

-

gen

5

(1 Shenzhen YHLO Biotech Co. , Ltd. , Shenzhen 518116, China)

(2 General Hospital of Southern Theater Command, Guangzhou 510010, China)

(3 Tongji Hospital affiliated to Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, China)

(4 Suzhou Institute of Biomedical Engineering and Technology, Chinese Academy of Sciences, Suzhou 215163, China)

(5 College of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China)

Abstract

Objective

：

To

establish

a

colloidal

gold

technique

assay

for

the

rapid

detection

of

antigen

against

severe

acute

respiratory

syndrome

coronavirus

2 (

SARS

-

CoV

-2 )

and

to

evaluate

its

clinical

performance

.

Methods

：

The

colloidal

gold

was

prepared

by

trisodium

citrate

reduction

.

The

monoclonal

antibody

of

mouse

anti

-

SARS

-

CoV

-2

nucleocapsid

protein

(

NP

)

and

dinitrophenol-bovine

serum

albumin

(

DNP

-

BSA

)

were

labeled

with

colloidal

gold

nanoparticles

.

The

monoclonal

antibody

of

mouse

anti-nucleocapsid

protein

and

rabbit

anti

DNP

polyclonal

antibody

were

coated

on

the

nitrocellulose

membrane

as

detection

line

and

quality

control

line

to

prepare

immunofluorescence

test

strip

.

The

performance

of

the

limit

of

detection

,

cross

-

reactivity

,

accelerated

stability

,

sensitivity

and

specificity

of

clinical

diagnosis

were

evaluated

.

Results

：

The

limit

of

detection

for

heat

inactivated

SARS

-

CoV

-2

was

2. 0

x

10"

TCID

50/

mL

.

There

were

no

cross

reaction

with

high

concentration

samples

1.

Nasopharyngeal

，the

specificity

or

cultured

virus

of

16

common

pathogens

.

The

kit

was

stable

after

8

weeks

accelerated

at

50

T

swab

samples

of

clinical

and

healthy

people

were

tested

,

the

sensitivity

was

96. 67%

was

99.23%

(29/30

)

(129/130) ,

the

total

coincidence

rate

was

98. 75% (158/160) ,

and

the

Kappa

consistency

test

-2

antigen

detection

reagent

(colloidal

had

a

Kappa

value

of

0. 959 0

(P

<0.05).

Conclusion

：

The

SARS

-

CoV

gold

method

)

has

the

advantages

of

high

sensitivity

and

specificity

,

fast

detection

speed

,

portable

operation

,

no

need

for

equipment

and

naked

eye

observation

,

which

can

be

used

as

a

supplementary

method

for

the

existing

SARS

-

CoV

-2

nucleic

acid

detection

method

.

SARS

-

CoV

Keywords -2

Antigen

Colloidal

gold

Immunochromatography

Performance

evaluation