2024年4月11日发(作者：)

周

丹等

约氏疟原虫丝

/

苏氨酸磷酸酶

5

抗血清对有性阶段生长抑制作用的研究

第

23

期

-

2817

-

doi

：

10.

3969/j.

issn.

1000-484X.

2020.

23.001

-

基础免疫学

•

约氏疟原虫丝

/

苏氨酸磷酸酶

5

抗血清对有性阶段生长抑制作用的研究

①

周

丹

于园超

洪明阳

朱晓彤

崔立旺

(

中国医科大学免疫学教研室

，

沈阳

110122)

中图分类号

R382.3T

文献标志码

A

文章编号

1000484X

(

2020

)

23-28174)5

［

摘

要

］

目的

:

探讨约氏疟原虫丝/

苏氨酸磷酸酶

5(PyPP5)

作为传播阻断疫苗候选抗原的可行性

。

方法

:

PCR

扩增

PyPP5

蛋白优势抗原表位

,

克隆入

pET32a

(+)

载体

。

IPTG

诱导

PyPP5

重组蛋白

(

rPyPP5)

表达后

，

纯化并免疫小鼠获取抗血

清

。

体外实验观察抗

-

PyPP5

免疫血清对配子体出丝

、

动合子形成和转化率的影响

。

结果

:

成功制备抗

-

PyPP5

免疫血清

。

抗

-

PyPP5

免疫血清

(

1

:

5

倍稀释

)

使配子体出丝率

、动合子数目和动合子转化率分别下降

29.

89%

(

P<0.

05),38.

59%

(

P<0.

05)

和

64.

30%

(

P<0.

01

)。

结论

:

PyPP5

蛋白具有良好的抗原性

。

抗

-

PyPP5

免疫血清可有效抑制约氏疟原虫传播

。

［

关键词

］

约氏疟原虫

;

丝

/

苏氨酸蛋白磷酸酶

5

；

传播阻断疫苗

;

有性阶段

Inhibitive

effect

of

Plasmodium

yoelii

serine/threonine

phosphatase

5

on

sexual

stage

development

ZHOU

Dan

,

YU

Yuan-Chao

,

HONG

Ming-Yang,

ZHU

Xiao-Tong

,

CUI

Li-Wang

.

Department

of

Immunology

,

China

Medical

University

,

Shenyang

110122

,

China

[

Abstract

]

Objective

:

To

investigate

the

possibility

of selecting

Plasmodium

yoeli

serine/threonine

phosphatase

5

(

PyPP5

)

as

a

transmission

blocking

vaccine

candidate.

Methods

:

PCR

amplified

the

dominant

antigen

epitopes

of

PyPP5

protein

and

cloned

into

pET32a

(

+)

vector.

The

recombinant

PyPP5

(

rPyPP5

)

protein

was

induced

by

IPTG,

purified

and

immunized

mice

to

obtain

anti-PyPP5

serum.

The

effects

of

anti-PyPP5

serum

on

gametocyte

exflagellation

,

ookinete

formation

and

ookinete

conversion

rate

were

observed

in

vitro.

Results

:

Anti-PyPP5

serum

was

successfully

prepared.

Anti-PyPP5

serum

(at

1

:

5

dilution

)

decreased

gametocyte

exflagellation

,

the

number

of

ookinete

and

the

ookinete

conversion

rate

by

29.

89%

(

P<0.

05)

,38.

59%

(

P<0.

05)

and

64.

30%

(

P<

0.

01).

Conclusion

:

PyPP5

protein

has

good

antigenicity.

Anti-PyPP5

serum

can

effectively

block

the

transmission

of

Plasmodium

yoelii.

[

Key

words

]

Plasmodium

yoelii

；

Serine/threonine

protein

phosphatase

5

；

Transmission

blocking

vaccine

；

Sexual

stage

蛋白质可逆磷酸化修饰是存在于所有生物体的

丝

/

苏氨酸蛋白磷酸酶

(PPMs)

和酪氨酸蛋白磷酸酶

(PTPs)3

个家族

PPPs

的主要成员包括

：

PP1

、

重要生理机制

，

在细胞信号通路传导和细胞周期调

控中至关重要

。

蛋白质磷酸化和去磷酸化过程分别

由激酶和磷酸酶调控

。

近年来磷酸化修饰中相关蛋

PP2A

、

PP2B

和

PP7

等

［

4

,

5

］

o

恶性疟原虫

PP1

和

PP2A

在红内期表达

，

且

PP1

可影响疟原虫

DNA

的

白磷酸酶和激酶已作为药物靶点进行广泛研

究蛋白磷酸酶

(

phosphoprotein

phosphatases

,

PPase)

根据序列同源性和三维结构相似性可分为

合成

［

6

］

;

恶性疟原虫

PP7

在不同阶段表达水平具有

明显差异

:

在早期滋养体中几乎不表达

，

在晚期裂殖

体阶段表达水平达到峰值

［

7

］

。

丝

/

苏氨酸蛋白磷酸酶

5(PP5)

属于

PPP

家族

丝

/

苏氨酸蛋白磷酸酶

(

phosphoserine

and

phospho

­

threonine

residues

phosphatases

,

PPPs

)

、

Mg

2+

依赖的

成员

,PP5

的主要结构特征包括高度保守的

PP2Ac

结构域以及四肽重复序列

(

TPRs)

的

N

末端延伸

，

这

3

个四肽重复序列是

PP5

蛋白特有的

［

8

,

9

］

O

TPR

结

①

本文受国家自然科学基金

(No.

81971961)

资助

。

作者简介

：

周

丹

，

女

，

在读硕士

，

主要从事抗感染免疫方面研究

，

E-mail:958218878@

qq.

com

-

构域由一系列反平行的琢螺旋组成,它们通过疏水

相互作用聚集在一起形成一个摇篮状的沟槽

，

被认

通讯作者及指导教师

:

朱晓彤

，

女

，

博士

，

副教授

，

主要从事抗感染免

疫方面研究

,

E-mail

:

xtzhu@

cmu.

。

为参与了许多重要调节蛋白的结合

，

如热休克蛋白

90

(

heat

shock

proteins

90

,

Hsp90

)

［

l0

，

ll

］

o

TPR

和蛋

崔立旺

，

男

，

博士

，

教授

，

主要从事分子寄生虫

方面研究

，

E-mail

:

lcui@

health.

usf.

edu

-

白

C

端可形成环形结构

，

抑制

PP2Ac

结构域功能

,

-

2818

-

中国免疫学杂志

2020

年第

36

卷

因此在

PP5

蛋白发挥去磷酸修饰时起调控作用

。

1

mmol/L

IPTG

19

益

过夜诱导

。

9

000

r/min

离心

已有研究表明

,

PP5

在多种原虫生长过程中起作用

：

PP5

表达水平降低可导致柔嫩艾美耳球虫原虫

(

eimeria

tenella

PP5

,

EtPP5

)

二代裂殖子凋亡

[11]

;

敲

5

min

收菌

,

沉淀用

8

ml

天然结合缓冲液

(50

mmol/L

NaH

2

PO

4

-

2H

2

O,30

mmol/L

NaCl,10

mmol/L

咪唑

,

pH8.0)

吹打混匀后超声

。

超声开

3

s,

关

9

s,

5

min/

次

，

共

4

次

，

冰上进行

。

超声后

12

000

r/min

除布鲁氏锥虫

PP5

(

trypanosoma

brucei

PP5

,

TbPP5

)

基因可抑制锥虫生长

[7]

;

伯氏疟原虫

(

plasmodium

berghei

PP5

,

PbPP5

)

基因缺失可抑制有性阶段发

离心

15

min,

收集上清中可溶性蛋白

。

采用

HisPurTM

Ni-NTA

Magnetic

Beads

纯化

PyPP5

重组蛋

育

[12]

;

恶性疟原虫

PP5

(

plasmodium

falciparum

PP5

,

PfPP5)

在红内期表达

，

并与

Hsp90

相互作用

[l3]

o

综

白

(

rPyPP5)

o

10%

聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化

后的

PyPP5

重组蛋白

，

考马斯亮蓝染色检测蛋白表

达和纯化情况

。

免疫血清制备

：

6

~8

周龄

BALB/c

上

,

PP5

蛋白在原虫生长发育中具有重要作用

。

鉴于

PP5

蛋白在各种属原虫生长发育中发挥

的重要作用

，

本文通过生物信息学方法预测约氏疟

原虫

PyPP5

(

Py04697

)

优势抗原表位

,

扩增后克隆至

原核表达载体

，

获得

PyPP5

重组蛋白后免疫小鼠获

得抗血清

。

观察发现

,PyPP5

蛋白具有免疫原性和

免疫反应性

。

同时

，

抗

-

PyPP5

免疫血清在体内外均

具有传播阻断效果

。

上述研究结果为高效疟原虫传

播阻断疫苗的研发奠定了实验基础

。

1

材料与方法

1.1

材料

BALB/c

小鼠

(6

~8

周龄

，

雌性

)

；

约氏

疟原虫基因组

DNA(

gDNA

，

中国医科大学免疫学教

研室

)

；

KOD-Plus

(

Toyobo

)

;

FastDigest

BamH

I

(

Thermo

Fisher

Scientific

)

;

FastDigest

Not

I

(

Thermo

Fisher

Scientific

)

;

ClonExpress

域

One

Step

Cloning

Kit(Vazyme)

;

快速质粒小提试剂盒

(

TIANGEN)

;LB

Broth

(

Solarbio

);

RPMI1640

(

Gibco

)

;TaKaRa

Agarose

Gel

DNA

Purification

Kit

v2.

0(

TaKaRa

);

Pierce

TM

ECL

Plus

Western

blot

Substrate

、

HisPur

TM

Ni-NTA

Magnetic

Beads

A

6xHis

Tag

Monoclonal

Antibody

，

HRP

(

Thermo

Fisher

Scientific

);

胎牛血清

(

Hycl

one

)

o

1.2

方法

1.

2.1

约氏疟原虫丝

/

苏氨酸磷酸酶

5

(

Py04697

，

PyPP5)

基因合成及原核表达载体构建以约氏疟

原虫

gDNA

为模板扩增

PyPP5

目的片段

，

琼脂糖凝

胶电泳后进行胶回收纯化

。

pET32a(+)

原核表达载

体经

BamH

I

和

Not

I

限制性内切酶

37

益孵育

2

h

后

，

采用

Exnase

域

(

Vazyme)

重组酶与纯化后的

PyPP5

目的片段

37

益

30

min

进行重组反应

。

将连

接后的

pET32a(+)-PyPP5

表达载体转化入感受态

细胞中

，

筛选酶切鉴定和测序正确的阳性克隆株进

行

rPyPP5

诱导

。

1.

2.2

重组蛋白的表达

、

纯化与抗血清的制备

挑

取

pET32a(+)-PyPP5

阳性克隆加入

LB

培养基

(500

ml)

中

，

37

益摇至

OD

值为

0.2

~

0.4,

加入

雌性小鼠

20

只

，

PBS

免疫组和

rPyPP5

免疫组各

10

只

。

初次免疫中

，

rPyPP5

(50

滋

g/

只

)

与完全弗氏佐

剂使用三通管充分混合后皮下免疫小鼠

。

两周和四

周后进行二免和三免

,

rPyPP5

与不完全弗氏佐剂使

用三通管充分混合后皮下免疫

。

三免后第

10

天眼

球取血获取抗

-PyPP5

免疫血清

。

1.

2.

3

ELISA

检测抗

-

PyPP5

免疫血清中特异性抗

体滴度采用

10

滋

g

溶解在碳酸盐缓冲液中的

rPyPP5

包被

96

孔酶标板

,4

益过夜

。

PBS-T

洗

6

次

后

,

将免疫血清从

1

：

1

000

稀释至

1

:

256

000

，

每

孔加入

100

滋

l,37

益孵育

2

h

后

PBS-T

洗

3

次

，

加入

HRP

标记的羊抗鼠

IgG(1

:

5

000)

,37

益孵育

1

h

后

PBS-T

洗

6

次

，

加入邻苯二胺和

H

2

O

2

进行反应

，

加

入浓硫酸终止反应

,

波长

492

nm

处检测

OD

值

。

1.

2.4

提取约氏疟原虫不同阶段的蛋白

采用

1X10

7

个

Py

17XL

活虫感染昆明鼠

。

裂殖体纯化

:

感

染后第

3

天无菌心脏取血

，

加入到裂殖体培养基

(25%

胎牛血清

+

RPMI1640

+

链霉素

+

青霉素

)

中

,

37

益培养

20

h

o

培养后用

55%

的

Nycodenz

,

2

500

r/min

离心

30

min

,

分离纯化成熟裂殖体

。

环

状体纯化

:

纯化后的裂殖体尾静脉回输至小鼠体内

,

涂片观察

。

至环状体时

，

采用

80%

的

Nycodenz

进行

纯化

。

滋养体纯化:纯化后的裂殖体尾静脉回输至

小鼠体内

，

涂片观察

。

至滋养体时

，

采用

70%

的

Nycodenz

进行纯化

。

配子体纯化

:

感染后第

3

天喂

食磺胺嘧啶

(20

mg/L

)

,

48

h

后采用

48%

的

Nycodenz

分离纯化配子体

。

动合子纯化

:

感染后第

3

天

，

心脏采血

，

1

ml

全血加

9

ml

动合子培养基

(25%

胎牛血清

+

RPMI1640

+

链霉素

+

青霉素

,

pH8.

3)

,19

益

,24

h

体外进行动合子培养后

，

采用

62%

Nycodenz

分离纯化动合子期原虫

。

蛋白提取

:

上述纯化后各阶段约氏疟原虫用

0.

15%

saponin

冰

上裂解

8

min,

13

000

r/min

离心

5

min,PBS-PI

清洗

至上清无红色

(

去除血红蛋白

)

,

向沉淀中加入适量

的

M-PER

Mammalian

Protein

Extraction

Reagent

(

Ther

­

周

丹等

约氏疟原虫丝

/

苏氨酸磷酸酶

5

抗血清对有性阶段生长抑制作用的研究

第

23

期

-

2819

-

moFisher

）

o

米用

Western

blot

方法检测约氏疟原虫

清使配子体出丝数目减少

29.

89%

（

P

<0.

05,

图

3A

）

，

与

PBS

免疫血清相比差异具有统计学意义

,

提

各阶段蛋白的表达情况

。

1

・

2.

5

抗

-

PyPP5

免疫血清对原虫有性阶段生长抑

示抗

-

PyPP5

免疫血清对雄配子体出丝有抑制作用

。

制作用的观察

采用

1

伊

10

7

个

Py

17XL

活虫感染已

疟原虫动合子培养基中加入

1

:

5

倍稀释的抗

-

PyPP5

免疫血清与疟原虫培养

24

h

后可观察到动

连续腹腔注射苯肼

（

200

滋

l

；

6

mg/ml

）

2

d

的

BALB/c

小鼠

。

感染后第

3

天

，

将

1

：

5

倍稀释的

rPyPP5/

PBS

免疫的小鼠血清加入动合子培养基

（

25%

胎牛

合子形成减少

,

动合子数目减少

38.

59%

（

P

<0.

05

,

血清

+RPMI1640

+

链霉素

+

青霉素

）

中

,

25

益条件下

，

A

尾血与动合子培养基

1

:

4

混合培养

15

min,

培养结

束后取

1

滋

l

混合液涂片

，

在光学显微镜下计数配子

kD

170

130

110

体出丝数

。

取

10

滋

l

尾血加入

90

滋

l

动合子培养基

中

（

培养基中加入

1

:

5

倍稀释的

rPyPP5/PBS

免疫

的小鼠血清

）

,19

益培养

24

h

后

，

取

1

滋

l

涂片

，

用

4%

多聚甲醛和

0.007

5%

戊二醛固定

。

抗

-

Pys25

（

1

:

200

）

室温孵育

90

min,

羊抗鼠

Alexa

fluor

488

抗体

（

1

:

500

）

室温避光孵育

60

min

。

采用荧光显

微镜计数动合子数目和动合子转化率

。

蚊饲实验

：

直接蚊饲实验前

1

h,rPyPP5

免疫组和

PBS

免疫组

分别尾静脉注射

100

滋

l

抗

-

PyPP5

免疫血清和

PBS

免疫血清

，

蚊饲

2h,7d

后解剖蚊胃计数卵囊数量

。

1.

3

统计学处理

实验数据采用

GraphPad

Prism

6.

01

统计软件进行分析

。

P

<0.

05

表示差异具有统

计学意义

。

2

结果

2.1

重组蛋白表达纯化及免疫血清特异性

IgG

抗体滴度检测本研究中通过

Infusion

克隆方法成功

构建了

pET32a

（

+

）

-PyPP5

原核表达载体

。

SDS-PAGE

电泳分析可见

rPyPP5

（

约

50.

4

kD

）

的表达

,

蛋白大

小与预测蛋白分子量一致

（

图

1A

）

o

ELISA

检测结

果显示

，

应用

rPyPP5

免疫小鼠收集的血清与对照组

相比

，

抗体特异性水平升高

，

且抗

-

PyPP5

免疫血清

抗体滴度在

1

:

128

000

时与对照组有显著差异

（

P

<

0.

05

，

图

1B

）

o

2.2

PP5

在约氏疟原虫各阶段的表达情况

提取

约氏疟原虫不同阶段的蛋白质进行

SDS-PAGE

分

离

，

并用抗

-

PyPP5

免疫血清进行检测

。

结果显示

，

约氏疟原虫

PP5

蛋白在环状体

、

滋养体

、

裂殖体

、

配

子体

、

动合子等阶段均有表达,且在裂殖体期表达达

峰值

（

图

2A

）

o

采用抗

PyPP5

免疫血清进行的约氏

疟原虫各发育阶段的免疫荧光检测结果显示

:

PP5

蛋白在环状体

、

裂殖体

、

配子体和配子阶段定位于原

虫胞浆

（

图

2B

）

o

2.3

抗

-

PyPP5

免疫血清对有性阶段原虫的作

用

体外免疫血清抑制实验显示

，

抗

-

PyPP5

免疫血

70

55

—

rPyPPS

40

35

25

15

Dilutions

图

1

rPyPP5表达检测及免疫血清ELISA结果

Fig.

1

Expression

of

recombinant

rPyPP5

and

ELISA

results

of

immune

serum

Note

:

A.

Detection

of

recombinant

rPyPP5

by

coomassie

brilliant

blue

staining

；

B.

ELISA

results

of anti-serum

obtained

by

immunizing

mice

with

recombinant

rPyPP5.

PBS.

Anti-serum

obtained

by

PBS

immunization

；

PyPP5.

Anti-serum

obtained

by

immunizing

mice

with

recombinant

Plasmodium

yoelii

PP5

protein.

*

.

P

<

0. 05

；

*

*

. P

<0.

01.

图

2

PyPP5

各阶段表达和定位情况

Fig.

2

Expression

and

location

of

PyPP5

at

each

develop

­

ment

stage

Note

：

A.

Western

blot

of

Plasmodium

yoelii

cell

lysates

with

anti-PyPP5

serum.

R.

Ring

；

T.

Trophozoite

；

S.

Schizont

；

G.

Gametocyte

；

O.

Oo­

kinete.

Positions

of

pre-stained

molecular

mass

markers

are

indica­

ted.

Western

blot

with

anti-Hsp70

serum

is

shown

as

loading

con

­

trols.

Arrows

indicate

PyPP5

and

Hsp70

proteins

,

respectively.

Lower

panel

shows

the

bands

intensity

of

PyPP5

protein

at

each

stage.

Signal

intensity

was

normalized

by

Hsp70

results.

B.

Localization

of

PP5

proteins

at

Plasmodium

yoelii

each

develop

­

ment

stage.

-

2820

-

中国免疫学杂志

2020

年第

36

卷

图

3B)

o

同时

，

经过

1

:

5

倍稀释的抗

-

PyPP5

免疫血

清使动合子转化减少

64.

30%

(

P

<0.

01,

图

3C)o

上

疫血清小鼠血液的蚊卵囊数目减少

70.

23%

(

P

<

0.

001,

图

3D)o

吸食过继免疫

-

PyPP5

免疫血清小

述结果提示抗

-

PyPP5

免疫血清对动合子的形成和

成熟有抑制作用

。

与

PBS

免疫血清相比

,

吸食过继免疫

-

PyPP5

免

鼠血液的蚊感染率下降

7.

14%

(

表

1)o

上述结果

提示抗

-

PyPP5

免疫血清对蚊胃内卵囊形成有抑制

作用

。

3

讨论

蛋白质磷酸化在疟原虫有性生长发育阶段具有

重要作用⑺

o

蛋白磷酸酶由

PPP

、

PPM

和

PTP

三个

基因家族编码

［

13

］

o

PP5

属于

PPP

家族成员

，

具有多

图

3

抗鄄

PyPP5

免疫血清对有性阶段原虫的作用

Fig

・

3

Effect

of

anti-PP5

serum

on

sexual

stage

Note

：

A.

Effect

of

anti-PyPP5

serum

on

male

gametocyte

exflagellation

;

B.

Effect

of

anti-PyPP5

serum

on

ookinete

number

;

C.

Effect

of

anti-PyPP5

serum

on

ookinete

conversion

rate

;

D.

Effect

of

anti-

PyPP5

serum

on

oocysts

formation.

PBS.

Anti-serum

obtained

by

PBS

immunization

;

PyPP5.

Anti-serum

obtained

by

immunizing

mice

with

recombinant

Plasmodium

yoelii

PP5

protein.

*

.

P

<

0.

05

;

*

*

.

P

<0.

01;

*

*

*.

P

<0.

001.

表

1

抗鄄

PyPP5

免疫血清传播阻断效果

Tab

・

1

Transmission

blocking

effect

of

anti-PyPP5

serum

Index

PBS

PyPP5

Mosquitoes

infected/Dissected

55/5651/56

Prevalence

of

infection

(

%

)

1)

98.21

91.07

Reduction

in

prevalence

(

%

)

2)

-

7.

14

Oocyst

intensity

3

〉

331.

1

98.

57

SEM

4)

15.28

8.

664

Reduction

in

oocyst

intensity

(

%

)

5)

-

70.

23

Note

:

1)

Prevalence

of

infection

was

calculated

by

the

number

of

mosquitoes

infected/the

number

of

mosquitoes

dissected

in

each

groupx100%

;

2

)

Percent

reduction

of

prevalence

was

calculated

as

prevalence

of

in-

fection

PBS

-prevalence

of

infection

PyPP

5

;

3

)

Mean

number

of

oocysts

per

mosquito

midgut;

4

)

Standard

error

of

the

mean

;

5

)

Percent

reduction

in

oocyst

intensity

was

calculated

as

(

oocyst

intensity

PBS

-

oocyst

intensi-ty

PyPP

5

)

/oocyst

intensity

PBS

x100%

.

种功能

，

包括类固醇信号转导

、

MAP

激酶级联的衰

减以及调节细胞周期等

［

14

］

o

PP5

在约氏疟原虫中

的功能尚未有研究报道

。

传播阻

断疫苗

(

transmission

blocking

vaccine

,

TBVs)

经典候选抗原

，

包括受精前的靶抗原如

P48/

45

、

P230

，

受精后的靶抗原

P25

以及蚊虫中肠靶抗

原

［

⑸

。

P48/45

传播阻断效果明显

,

但其在体外无

法形成正确空间结构而导致研究受阻

。

恶性疟原虫

Pfs230

抗体可在蚊胃阻断疟原虫的发育

,

但是其阻

断活性依赖于补体

,

补体失活时

,

Pfs230

抗体的阻断

活性消失

［16

，

17

］

o

受精后靶抗原

P25

为动合子表面

蛋白

,

具有很强的免疫活性

，

但其存在有限的抗原多

态性

［

⑻

o

本研究发现

，

约氏疟原虫

PP5

重组蛋白免

疫血清具有良好的免疫原性和抗原性

,

提示约氏疟

原虫

PP5

蛋白可作为传播阻断疫苗候选抗原

。

有

研究发现

，

伯氏疟原虫

PP5

免疫血清

1

:

5

倍稀释时

可使配子体出丝数目和动合子转化率减少

［

19

］

o

而

在本研究中

，

约氏疟原虫

PP5

免疫血清

1

:

5

倍稀释

时使配子体出丝率和动合子转化率分别下降

29.

89%

和

64.30%

。

上述研究结果提示

，

约氏疟原

虫

PP5

免疫血清对配子体出丝

、

部分动合子的形成

和成熟均有抑制作用

。

同时

，

本研究发现

PyPP5

免

疫血清对蚊胃内卵囊形成有抑制作用

。

以上结果说

明

PyPP5

免疫血清对约氏疟原虫有性阶段的生长

发育有抑制作用

。

综上所述

,

本研究采用原核表达技术获得约氏

疟原虫

PP5

蛋白

，

并制备

PyPP5

特异性免疫血清

。

另外

，

本研究通过体外抑制实验证实

PyPP5

免疫血

清可以有效抑制有性阶段原虫的生长发育

，

从而为

TBVs

的研发提供了一定的实验基础

。

参考文献

：

［

1

］

McCluskey

A

,

Sim

AT

,

Sakoff

JA.

Serine-threonine

protein

phosphatase

inhibitors:

Development

of

potential

therapeutic

strategies

］

〕］

.

J

Med

Chem,2002,45(6)

：

1151-1175.

周

丹等

约氏疟原虫丝

/

苏氨酸磷酸酶

5

抗血清对有性阶段生长抑制作用的研究

第

23

期

[2]

Khan

MZ

,

Kaur

P

,

Nandicoori

VK.

Targeting

the

messengers

:

-

2821

-

[12]

Zhu

X

,

Sun

L,He

Y,

et

al.

Plasmodium

berghei

serine/

threonine

protein

phosphatase

PP5

plays

a

critical

role

in

male

gamete

Serine/

threonine

protein

kinases

as

potential

targets

for

antimycobacterial

drug

development

[

J].

Iubmb

Life

,

2018

,

70

(9)

:889-904.

[3]

Y

ang

C

,

Arrizabalaga

G.

The

serine/threonine

phosphatases

of

api-

fertility[J]

.

Int

J

Parasitol

,2019,49(9)

：

685-695.

[13]

Gomes

EG

,

Connelly

SF,

Summy

JM.

Targeting

the

yin

and

the

yang:Combined

inhibition

of

the

tyrosine

kinase

c-Src

and

the

tyrosine

phosphatase

SHP-2

disrupts

pancreatic

cancer

signaling

and

biology

in

vitro

and

tumor

formation

in

vivo

[J].

Pancreas

,

complexan

parasites

[J].

Mol

Microbiol

,2017,106(

1)

：

1-21.

[4]

Bajsa

J

,

Duke

SO

,

Tekwani

BL.

Plasmodium

falciparum

serine/

threonine

phoshoprotein

phosphatases

(

PPP

)

:

From

housekeeper

to

the

holy

grail

[

J

].

Curr

Drug

Targets,2008

,9(11)

：

997-1012.

[14]

2013,42(5)

：

795-806.

Borthwick

EB

,

Zeke

T

,

Prescott

AR,et

al.

Nuclear

localization

of

[5]

Leslie

SN

,

Nairn

AC.

cAMP

regulation

of

protein

phosphatases

PP1

protein

phosphatase

5

is

dependent

on

the

carboxy-terminal

region

and

PP2A

in

brain

[

J

].

Biochim

Biophys

Acta

Mol

Cell

Res

,2019

,

1866(1)

:64-73.

[6]

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[J].Febs

Lett,2001 ,491(3)

：

279-284.

Wetzel

D

,

Chan

JA

,

Suckow

M

,

et

al.

Display

of

malaria

Kumar

R

,

Adams

B

,

Oldenburg

A

,

et

al.

Characterisation

and

expression

of

a

PP1

serine/threonine

protein

phosphatase

(

PfPP1

)

transmission-blocking

antigens

on

chimeric

duck

hepatitis

B

virus-

derived

virus-like

particles

produced

in

Hansenula

polymorpha

from

the

malaria

parasite

,

Plasmodium

falciparum

:

Demonstration

of

[J].PLoS

One,2019,14(9)

:

e0221394.

[16]

its

essential role using

RNA

interference[J

].

Malar

J

,2002,1(1)

:

Riley

EM

,

Williamson

KC

,

Greenwood

BM

,

et

al.

Human

immune

recognition

of

recombinant

proteins

representing

discrete

domains

111-121.

[7]

Kutuzov

MA

,

Andreeva

AV.

Protein

Ser/Thr

phosphatases

of

parasitic

protozoa

[

J].

Mol

Biochem

Parasitol

,

2008

,

161

(2

)

：

of

the

Plasmodium

falciparum

gamete

surface

protein

,

Pfs230

[J].

Parasite

Immunol

,

1995,17(1)

:

11

-19.

81-90.

[8]

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刘

晓

，

蒋

琳

.

传播阻断型疟疾疫苗的研究进展

[J].

微生

物学免疫学进展

,2010,38(4)

：

83-87.

Liu

X

,

Jiang

L.

Progress

in

research

on

transmission

blocking

Dushukyan

N

,

Dunn

DM

,

Sager

RA

,

et

al.

Phosphorylation

and

ubiquitination

regulate

protein

phosphatase

5

activity

and

its

prosurvival

role

in

kidney

cancer

[J].

Cell

Rep

,2017,21

(7)

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1883-1895.

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Prog

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,

2010,38

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)

：

83-87.

[18]

Dobson

S

,

Kar

B

,

Kumar

R

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et

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A

novel

tetratricopeptide

repeat

Saxena

AK,

Wu

Y

,

Garboczi

DN.

Plasmodium

p25

and

p28

surface

proteins:

Potential

transmission-blocking

vaccines

[

J

]

.

(

TPR

)

containing

PP5

serine/threonine

protein

phosphatase

in

the

malaria

parasite

,

Plasmodium

falciparum

[

J].

BMC

Microbiol

,

2001

,1(1)

：

133-164.

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Eukaryot

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1260-1265.

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孙

林

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洪明阳

,

曹雅明

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等

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伯氏疟原虫丝

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苏氨酸磷酸酶

5

抗血清对有性阶段生长抑制作用的研究

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中国免疫学杂

Connarn

JN

,

Assimon

VA

,

Reed

RA

,

et

al.

The

molecular

chaperone Hsp70

activates

protein

phosphatase

5

(

PP5

)

by

binding

the

tetratricopeptide

repeat

(

TPR)

domain

[

J]

.

J

Biol

志

,2019,35(8)

：

921-926.

Sun

L,

Hong

MY

,

Cao

YM,

et

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The

inhibitive

effect

of

Plasmodium

berghei

serine

/threonine

protein

phosphatase

5

on

sexual

stage

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8

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[11]

Hong

TJ

,

Kim

S

,

Wi

AR

,

et

al.

Dynamic

nucleotide-dependent

in

­

teractions

of

cysteine-

and

histidine-rich

domain

(

CHORD

)

-

921-926.

containing

Hsp90

cochaperones

Chp-1

and

melusin

with

cochaperones

PP5

and

Sgt1

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J

Biol

Chem

,

2013,288

(

1

)

：

215-222.

[

收稿

2019-11-12

修回

2020-02-02]

(

编辑倪鹏

)

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中国免疫学杂志

》