2023年7月17日发(作者：)

维普资讯

・２６・　Ｃｈ　ｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＴＣＭ　榄香烯乳对人宫颈癌Ｈｅ　ｌ　ａ细胞转录因子ＥＬＫ　１　及其靶基因的影Ⅱ向　陈小军　，顾立刚‘，李佩文　，石太平　，马大龙　（１、北京中　约大学免疫学教研掌，北京１０００２９：２．中日友好医院中医肿瘤科，北京１０００２９：　３．　家人类基　组北方研究中心，北京１００１７６）　摘要：目的观察中药榄香烯乳对人宫颈癌Ｈｅ１ａ细胞转录因子ＥＬＫ１及其靶基因的影响，以深入了解榄香烯乳的　抗癌机制。方法　用ＭＴＴ法检测药物对细胞的抑制作用，双荧光素酶报告系统检测药物对转录因子ＥＬＫ１的影　响，Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂ１０ｔ检测磷酸化ＥＬＫ１及其靶基因ｃ—ｆｏ　ｓ表达。结果下调。结论的生长。　榄香烯乳能明显抑制人宫颈癌Ｈｅ１ａ细胞的生长，　其半数生长抑制剂量为８０．６　Ｉ．ｔｇ／ｍＬ；榄香烯乳处理组荧光素酶活性下降，磷酸化的ＥＬＫ１及其靶基因ｃ—ｆｏ　ｓ的表达均　榄香烯乳可能通过下调转录因子ＥＬＫｌ的磷酸化水平，抑制ｃ－ｆｏｓ的表达，从而抑制人宫颈癌Ｈｅ１ａ细胞　关键词：榄香烯乳；Ｈｅ１ａ细胞；ＥＬＫ１　中图分类号：Ｒ２８５．５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５—５３０４（２００８）０１—００２６—０２　Ｅ自ｒｅｃｔ　Ｏｆ　ｍｍｅ￣ｅ　Ｏｎ　Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｆａｃｔｏｒ　ＥＬＫｌ　ａｎｄ　Ｉｔｓ　Ｔａｒｇｅｔ　Ｇ蚰ｅ　ｏｆ　Ｈｕｍａｎ　Ｃｅｒｖｉｘ　ＣＡＩＩｌＣＭ＂　Ｈｅｌａ　ＣｅⅡＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ－ｊｕｎ　，ＧＵ　Ｌｉ—ｇａｎｇ　，ＬＩ　Ｐｅｉ—ｗｅｎ　，ｅｔ　ａｌ　ｆ　．Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　ＴＣＭ，Ｂｅｑｉｎｇ　１０００２　９＇Ｃｈｉｎａ￣　２．Ｃｈｉｎａ—Ｊａｐａｎ　Ｆｒｉｅｎｄｓｈｉｐ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅ￣ｊｉｎｇ　１０００２９，Ｃｈｉｎａ）　ＡｉＷｌｍｅｔ：Ｏｂｊ￣ｅ　Ｔｏ　ｓ山ｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｌｅｍｅｎｅ　ｏｎ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ＥＬＫ１　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｔａｒｗｔ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｃｅｒｖｉｘ　ｃａｎｃｅｒ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌ１．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ａｓｓｅｓｓｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ａｓｓａｙ．Ｔｈｅ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ＥＬＫ１　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｄｕａｌ—Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　Ｒｅｐｏｒｔｅｒ　Ａｓｓａｙ　Ｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｏｓｐｈｏｒａｔｅｄ　ＥＬＫ１　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅ　ｃ—ｆｏｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔ．　Ｒ　咂ｌｔＢ　Ｅｌｅｍｅｎｅ　ｃａｎ　ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗ￣＿ｈ　ｏｆ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌｌ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ＩＣ５ｏ　ｗａｓ　８０．６　ｉ￣ｇ／ｍＬ．Ｔｈｅ　ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ　ａｃｔｉｉｔｖｙ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ　ＥＬＫ１　ｉｎ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌｌｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｌｅｍｅｎｅ　ｗａｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ．Ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｏｓｐｈｏｒａｔｅｄ　ＥＬＫ１　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｔａｒｇｅｔ　ｇｅｎｅ　ｃ—ｆｏｓ　ｉｎ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌｌｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｌｅｍｅｎｅ　ｗｅｒｅ　ｄｏｗｎ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄ．Ｃｏｎｄｗｉｏｎ　Ｅｌｅｍｅｎｅ　Ｃａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｈｕｍａｎ　ｃｅｒｖｉｘ　ｃａｎｃｅｒ　Ｈｅｌａ　ｃｅｌｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈ　ｍａｙ　ｂｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｃ—ｆｏｓ　ｇｅｎｅ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｐｈｏｓｐｈｏｒａｔｅｄ　ＥＬＫ１．　Ｋｅｙ　ｗｏｒ￣：ｅｌｅｍｅｎｅ；Ｈｅｌａ　ｃｅｌｌ；ＥＬＫ１　榄香烯乳足从中药温莪术挥发油中分离出来的油状物单　１．２细胞培养　体，已证口』ｊ具有多种抗癌效应　，属阍家一：类抗痛新药。前期　研究发现，榄香烯乳对人寓颈癌Ｈｅｌａ细胞的体外增殖有明显　的抑制作刚　，　其内　机制尚小消楚。为此，本研究采用榄香　烯乳处理人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞，观察了对细胞转录　子ＥＬＫ１及　其靶基因Ｇ－ｆｏｓ表达的影响。　１材料与方法　１．１仪器与试药　将人宫颈癌Ｈｅｌａ细胞以含１０％ｆｌ￣牛血清的ＤＭＥＭ在３７℃、　５％ｃ０　孵箱中培养，取对数生Ｋ期的细胞进行实验。　１．３细胞增殖申『　肯１实验　取对数生长期的Ｈｅｌａ细胞接种于９６孔培养板（细胞数为　５×１０　／４Ｌ，１００　ｕＩ　／ＴＬ），加入不同浓度的榄香烯乳，使其终浓度　分别为０、２０、４０、８０、１６０、３２０　ｐｇ／ｍＬ，３７℃、５％ＣＯ　孵箱　中培养２４　ｈ后每孔加入ＭＴＴ溶液ｌ５　，继续培养４　ｈ后每孔　加入裂解终止液１００　，３７℃、５％ＣＯ　孵箱中培养１　ｈ，酶联检　测仪５７０　ｎｍ波长处测定吸收度Ａ值，并求其Ｉｃ　。值。　１．４质粒转染　榄香烯乳，人连金港制药有限公叫产品。人寓颈癌Ｈｅｌａ　细胞株，圉家人类基因组北方研究巾心功能基因组ＩⅡ细胞库提　供。胎牛血清、ＤＭＥＭ均为Ｈｙｃｌｏｎｅ公司产品。ＭＴＴ、双荧光素　酶试剂盒和报占基冈ｐＦＡ２一ＥＬＫ１均为Ｐｒｏｍｅｇａ产品。高效真核转　染试剂盒为威格拉斯仪器冉限公刊产品。抗Ｐ－ＥＬＫ１为Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ公司产品。抗Ｃ　ｆｏｓ和抗Ｂ—Ａｃｔｉｎ为Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ公　司产ｉ｝『Ｉ。　人寓颈癌Ｈｅｌａ细胞以１×１０　／－Ｅ接种于９６孔培养板，２４　ｈ　后根据高效真核转染试剂盒说明书进行转染。将报告基因质粒　ｐＦＡ２一ＥＬＫ１和内参质粒ｐＲＬ—ＴＫ共转染入上述细胞培养孔中，三　复孔，再复３次。　１．５双荧光素酶活性测定　通讯作者：顾立刚，Ｅ－ｍａｉ　１：ｇｕｌｇａｎｇ￣２６　３．ｎｅｔ　６　ｈ后加入Ｉｃ　。浓度的榄香烯乳，３７℃、５％ｃ０　孵箱中培