2024年3月5日发(作者：索尼摄像机最新款)
T7 RiboMAXTM Express RNAi System (Promega)
一、dsRNA的大量合成
1. 在室温建立合适的反应体系（室温配制一下反应液）；
RiboMAXTM Express T7 2×Buffer* 10 μL
正义模板 4 μL
反义模板 4 μL
Enzyme Mix，T7 Express 2 μL
Total 20 μL
*冻存的RiboMAXTM Express T7 2×Buffer可能含有沉淀，可在37℃温浴中溶解后混匀。注意，试剂中含有亚精胺，在低于室温下可使DNA沉淀。
2. 轻微混匀，37℃温浴2-6 h；（4 h）
二、残留DNA模板的去除，dsRNA的退火生成，ssRNA的去除
3. 温浴结束后将反应液于70℃水浴10 min，之后缓慢降至室温（~20 min）；
4. 向冷却至室温的反应液中加入1 μL RNase A Solution（稀释200倍，1 μL RNase
Solution+199 μL RNA-free H2O）和1 μL RQ1 RNase-FreeDNase，37℃孵育30 min；（丢弃稀释后的RNase Solution，下次不可用）
三、双链RNA的纯化
5. 加入20 μL 3M醋酸钠，50 μL 95%的乙醇，冰浴5 min；（吸到1.5 mL离心管中）
6. 16 000g离心10 min，可见离心管底有白色沉淀；
7. 小心弃去（吸去）上清，用500 μL预冷的70%乙醇洗涤沉淀2次，弃上清，室温空气干燥15 min，加100 μL RNA-free H2O溶解沉淀；
8. 将产物放在-70℃保存。（取1 μL稀释100倍检测浓度，凝胶检测）
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