2024年4月8日发(作者：win10无法激活怎么办)

浙江实用医学２０１１年１２月第１６卷第６期　ｅｊｉａＩ１ｇ　Ｐｒａｃｔｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１１，Ｖｏ１．１６，Ｎｏ．６　・４０１・　

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基础研究・　

英夫利昔单抗对兔骨关节炎动物模型的影响　

吕洪华张乾坤　吴雪莲　

（丽水市中心医院，浙江丽水３２３０００）　

【摘要】　目的评估关节内注射英夫利昔单抗对兔骨关节炎（ＯＡ）动物模型的影响。方法３０只新西兰大白兔参照　

Ｈｕｌｔｈ法建立兔０Ａ动物模型，８周后随机分为英夫利昔单抗１０ｍｇ／ｍＬ（０．５ｍＬ）组、英夫利昔单抗２０ｍｇ／ｍＬ（０．５ｍＬ）组和生理盐　

水（０．５ｍＬ）组，每组各１Ｏ只，每月给药１次，共３次。３个月后取关节液测定关节液中Ⅲ一１Ｂ、ＴＮＦ—ａ、Ｎ０的表达，取关节软骨　

观察软骨总体形态及软骨微形态的变化。结果英夫利昔单抗１０ｍｇ／ｍＬ组和英夫利昔单抗２Ｏｍｇ／ｍＬ组１　—ａ及ＮＯ表达　

水平均显著低于生理盐水组（Ｐ＜０．０５），两治疗组之间无显著性差异（Ｐ＞Ｏ．ｏ５）。ＩＩＪ一１ｐ的表达水平两治疗组与生理盐水组　

之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。英夫利昔单抗ｌＯｍｇ／ｍＬ组和英夫利昔单抗２０ｍｇ／ｍＬ组软骨损伤（总体变化和微观变化）较生　

理盐水组减轻，两治疗组之问无显著性差异。结论关节内注射英夫利昔单抗有软骨保护作用。　

【关键词】英夫利昔单抗关节内注射骨关节炎　

公司。　

关节软骨的丢失和破坏是骨关节炎（ＯＡ）的主　

要特征，越来越多的证据表明ＯＡ不仅仅是一种退　

１．４　软骨总体形态及微形态的观察第１次给药　

变性关节炎，大量的炎症因子如白介素一１ｌ３（几一　

１１３）、肿瘤坏死因子一ａ（ＴＮＦ—ａ）等参与了软骨破坏　

的过程　Ｉ２ｊ。英夫利昔单抗（ｉｎｆＬｉｘｉｍａｂ）是一种可　

３个月后，将动物处死，肉眼观察股骨软骨形态的变　

化。切取负重关节面带少量软骨下骨的全层软骨，　

无菌生理盐水冲洗后，１０％中性缓冲甲醛固定液固　

定，５％甲酸甲醛脱钙液脱钙１周，加强梯度脱水。　

二甲苯Ｉ透明２０分钟，浸蜡２小时，Ｌｅｉｃａ　ＥＧ１１４０Ｈ　

溶性抗ＴＮＦ—ａ抗体，目前被广泛用于治疗类风湿　

关节炎（ＲＡ）。本研究中作者将评价英夫利昔单抗　

是否对兔ＯＡ动物模型有软骨保护作用。　

１材料与方法　

石蜡包埋仪包埋成石蜡块，制成石蜡切片。行ＨＥ　

染色，ＯＬｙｍｐｕｓ　ＢＨ一２光学显微镜观察并拍摄照片。　

结果分析按照Ｍａｎｋｉｎ评分标准由两名观察者分别　

１．１　兔ＯＡ动物模型的建立新西兰大白兔共３Ｏ　

独立进行评分，取均值。　

只，体质量２．１～３．０Ｋｇ，由温州医学院实验动物中　

心提供。１０％水合氯醛（４ｍＩＭＫｇ）耳缘静脉麻醉后，　

参照Ｈｕｈｈ法【　］建立兔ＯＡ动物模型，单笼饲养，鼓　

励动物活动。　

１．２　分组与给药手术后８周，３０只兔子随机分　

１．５统计学处理所有计量资料以（　±Ｓ）表示，　

组问差异采用两个独立样本的ｔ检验进行比较。　

统计分析用ＳＰＳＳ１６．０软件。　

２结果　

为英夫利昔单抗１０，￣ｇ／ｍＬ（Ｏ．５ｍＬ）组、英夫利昔单　

抗２０ｍｇ／ｍＬ（０．５ｍＬ）组和生理盐水（０．５ｍＬ）组，每组　

各１Ｏ只，每月给药１次，共３次。　

２．１　关节液中ＩＬ一１Ｂ、１＇ＮＦ—ｃ【、ＮＯ的表达表１　

显示各组关节液中ＩＬ一１８、ＴＮＦ—ａ及ＮＯ表达水　

平，其中ＴＮＦ—ａ及ＮＯ表达水平两治疗组均显著低　

第１　

于生理盐水组（Ｐ＜０．０５），两治疗组之间无显著性　

差异（Ｐ＞０．０５）。ＩＬ—ｌＪ３的表达水平两治疗组与生　

理盐水组之间无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。　

１．３　关节液中ＩＬ一１ｊ３、ＴＮＦ—ａ、ＮＯ的测定

次给药３个月后，取关节积液，通过ＥＬＩＳＡ法测定　

ＩＬ一１Ｇ、ＴＮＦ—ａ的含量，通过Ｇｒｉｅｓｓ法测定Ｎ０的含　

量。ＥＬＩＳＡ试剂盒购于上海西唐生物科技有限　

基金项目：丽水市科技局第二批医学重点建设学科科技项目　

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４０２・　浙江实用医学２０１１年１２月第ｌ６卷第６期Ｚｈｅｊｉａｎｇ　ＰｒａｃｔｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅＤｅｃｅＭｂｅｒ，２０１１，Ｖｏ１．１６，Ｎｏ．６　

表１各组关节液中Ⅱ｜一眠ＴＮＦ—ｄ、ＮＯ浓度比较　

与对照组比较　Ｐ＜Ｏ．０５；与英夫利昔单抗１０　“ｌｌＪ组比较　Ｐ　

＞０．０５　

２．２　软骨总体形态变化正常兔膝关节软骨表面　

平滑有光泽，呈浅蓝白色。在生理盐水组中，软骨　

呈黄白色，无光泽，可见明显的裂缝和软骨缺失，股　

骨髁状突可见骨赘形成（见第４６７页图１Ａ）。在两　

治疗组中，仍可见软骨丢失，但严重程度较生理盐　

水组明显减轻（见第４６７页图１Ｂ、图１Ｃ）。　

２．３　软骨微形态变化　生理盐水组可见软骨很　

薄，溃疡深达钙化层伴软骨下骨暴露，部分可见软　

骨结构完全破坏，细胞数目大量减少，可见梭形细　

胞，ＨＥ染色减少，部分软骨不着色，潮线被破坏并　

可见钙化层与软骨下骨的破坏（见第４６７页图２Ａ）。　

治疗组可见软骨较薄，裂隙可深至钙化层，部分区　

域软骨结构完全破坏，软骨细胞的数量减少，ＨＥ染　

色减弱，潮线被破坏并可见钙化层和软骨下骨的破　

坏，程度均较生理盐水组减轻（见第４６７页图２Ｂ、图　

２ｃ）。Ｍａｎｋｉｎ’ｓ评分显示英夫利昔单抗ｌＯｍｇ／ｍＬ组　

（２．７±０．９）、英夫利昔单抗２０ｍｇ／ｍＬ组（２．４±０．７），　

明显低于生理盐水组（６．４±１．２）（Ｐ＜０．０５）（表２）。　

两治疗组问比较差异无统计学意义。　

表２　３组软骨组织学评分　

与对照组比较　Ｐ＜０．０５；与英夫利息单抗ｍｍｇ／ｍＬ组比较　

Ｐ＞０．０５　

３讨论　

近年来生物因子在ＯＡ发病发展中的作用日益　

受到重视，生物因子网络失调与ＯＡ发病以及病程　

进展关系密切，ＩＬ一１８、ＴＮＦ—Ｃｔ－，ＮＯ作为体内重要的　

炎性介质，可导致基质金属蛋白酶（ＭＭＰｓ）的水平增　

高，从而诱导软骨细胞凋亡、造成关节软骨的损　

伤［４－５］。　

本实验中发现英夫利昔单抗可有效的降低关　

节液中ＴＮＦ—Ｑ、ＮＯ的表达水平，而对ⅡＪ一１Ｂ的表　

达水平无显著影响。ｒＩ＇ＮＦ—ａ和ＩＬ一１ｐ是由ＯＡ患　

者软骨细胞产生的，可激活诱导型一氧化氮合成酶　

（ｉＮＯｓ）表达，产生ＮＯ，从而诱导软骨细胞凋亡。目　

前，多数学者认为　Ｆ—ａ和ＩＬ—ｌｐ等在关节软骨　

代谢方面处在炎症因子的上游，而ＮＯ在处于炎症　

因子的下游，起信使传递作用＿６Ｊ。故认为英夫利昔　

单抗通过抑制ＴＮＦ—ａ降低了ＮＯ的表达水平。　

Ｍａｎｋｉｎ评分是研究软骨组织损伤程度的经典　

方法，结合软骨的结构、细胞数量、基质异染性和潮　

线完整性等四个方面进行评分。在本实验中发现，　

两治疗组在软骨总体结构、软骨微结构、Ｍａｎｋｉｎ评　

分等方面均优于生理盐水组，提示英夫利昔单抗能　

从组织学水平上改善兔骨关节软骨的损伤进程，无　

浓度依赖性，但是尚不能最终阻止软骨退变和发生　

发展的进程。　

由于对ＯＡ确切的发病机制不清楚，目前对于　

ＯＡ的治疗上无论是药物还是手术都只能是对症处　

理，而不能从根本上针对ＯＡ的病因进行治疗。近　

年来随着对细胞因子（ＣＫ）、基质金属蛋白酶　

（ＭＭＰｓ）、生物自由基（如ＮＯ）及细胞凋亡在ＯＡ发　

病中的研究的深入，让人们看到了寻找在分子生物　

学水平上阻断骨关节炎发生发展的药物的希望，英　

夫利昔单抗有可能成为骨关节炎治疗的一种新的　

手段。　

参考文献　

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（３）：４００　

Ｗｈｉｔｅ　Ｗ　Ｂ．１１１ｅ　ＰｏｔｅｎｔｉＬａ　ｒｏＬｅ　ｏｆ　ｎｉｔｒｉｃ　ｏｘｉｄｅ　ｉｎ　ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕＬａｒ　ｓａｆｅ　

ｔｙ　ｗｈｅｎ　ｔｒｅａｔｉｎｇ　ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｉｆｓ　ｉｎ　Ｐａｔｉｅｎｔｓ　ｗｉｔｈ　ｈｙＰｅｒｔｅｎｓｉｏｎ

．

Ａｍ［Ｊ］　

Ｍｅｄ，２０ｏ９，１２２（５）：１　

Ｎｅｅ　Ｌ，Ｓ　Ｏ’ＣｏｒｍｅＬＬ，Ｓ　ＮｏＬａｎ，ｅｔ　ａ１．Ｎｉｔｉｒｃ　ｏｘｉｄｅ　ｉｎｖｏＬｖｅｍｅｎｔ　ｉｎ　

ＴＮＦ—ａｌｐｈａ　ｎａｄ　ＩＬ一１　ｂｅｔａ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｍｅｓａｎｇｉａＬ　

ｃｅＬＬＭＭＰ一９　ａｎｄⅡＭＰ一１．Ｎｅｐｈｒｏｎ　Ｅｘｐ　ＮｅｐｈｒｏＬ，２００８，１１０　

（２）：５９　

…