2024年3月20日发(作者：子网掩码怎么填)

安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ　Ａｇｎ．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２０１０，１６（１７）　５１　

中国樱桃离体叶片愈伤组织诱导的研究　

彭丽萍　张远兵　胡正和　

（安徽科技学院生命科学学院，安徽风阳２３３１００）　

摘要：以中国樱桃试管苗的离体叶片为外植体，ＭＳ为基本培养基，研究２，４一Ｄ和６一ＢＡ以及ＮＡＡ和６一ＢＡ的不　

同浓度组合，以及叶片的不同部位、暗处理对愈伤组织诱导的影响。结果表明：培养基ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ　２．４一Ｄ＋２．　

Ｏｍｇ／Ｌ　６一ＢＡ－４－３％蔗糖对愈伤组织的诱导最好，叶基部（包含部分叶柄）诱导率可达１００％，暗处理５ｄ，然后转入光照　

下培养可提高叶尖部和叶中部愈伤组织的诱导效果。　

关键词：中国樱桃；离体叶片；愈伤组织；诱导　

中图分类号￥６６２．５　文献标识码Ａ　文章编号１００７—７７３１（２０１０）１７—５１—０３　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｉｎｄｕｃｉｎｇ　Ｃａｌｌｕｓ　ｏｆ　Ｖｉｔｒｏ　Ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃｈｅｒｒｙ　

Ｐｅｎｇ　Ｌｉｐｉｎｇ　ｅｔ　ａｉ．　

（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ａｎｈｕｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｅｎｇｙａｎｇ　２３３１００，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｖｉｔｒｏ　ｌｅａｖｅｓ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃｈｅｒｒｙ　ｗａｓ　ａｓ　ｅｘｐｈａｎｔ，ＭＳ　ｗａｓ　ｂａｓｉｃ　ｍｅｄｉｕｍ．Ｓｔｕｄｙｉｎｇ　ｏｎ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　

２，４一Ｄ　ａｎｄ　６一ＢＡ，ＮＡＡ　ａｎｄ　６一ＢＡ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｒｔｓ　ｏｆｔｈｅ　ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｉｌｌｕｍｉｎａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｆｏｒ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｃａｌｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　

ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ＭＳ＋２．０ｍ＃Ｌ２，４一Ｄ＋２．０ｍｇ／Ｌ６一ＢＡ＋３％ＳＵＣｒＯＳｅ　ｗａｓ　ｂｅｓｔ　ｆｏｒ　ｃａｌｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ，Ｃａｌｌｕｓ　

ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂａｓｅ　ｏｆ　ｌｅａｖｅｓ（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｐａｒｔ　ｏｆ　ｐｅｔｉｏｌｅ）ｃａｎ　ａｍｏｕｎｔ　ｔｏ　１００％．Ｔｈｅ　ｃｏｎｄｕｃｔｉｎｇ　ｏｆ　ｄａｒｋ　ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　

５　ｄａｙｓ，ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｍｏｖｅｄ　ｔｏ　ｌｉｇｈｔ　ｃｕｌｔｉｖａｔｉｎｇ　ｃａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｉｐ　ａｎｄ　ｌｅａｖｅｓ　ｃｅｎｔｒａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃａｌｌｕｓ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｃｈｅｒｒｙ；Ｖｉｔｒｏ　ｌｅａｖｅｓ；Ｃａｌｌｕｓ；Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　

中国樱桃（ｐｒｕｎｕｓ．ｐｓｅｕｄｏｃｅｒａｓｕ）俗称小樱桃，在我国　

尖部，切割成适当大小（Ｏ．５　ｃｍ×０．５　ｃｍ），接种到培养基　

上进行培养观察，以ＭＳ为基本培养基附加不同浓度的６　

一

栽培历史悠久，其果实色艳质优，味甜而有芳香，是落叶果　

树中成熟期最早的树种之一，能调节市场淡季鲜果供应。　

樱桃还具有很好的医疗保健作用，具有调中益气，健脾和　

胃，养颜驻容，去皱消斑等功效　，因此樱桃是深受人们欢　

迎的果品，目前市场售价很高。我国南北方均有优良品种　

栽培，安徽省主栽品种中绝大多数为中国樱桃。中国樱桃　

的优良品种很少，其品种繁多，栽培品种中普遍表现出果　

小、味酸、采前裂果、落果等诸多缺点。通过组织培养手段　

来改良品种以及保存优良种质资源，加快优良品种繁殖速　

ＢＡ与ＮＡＡ进行实验，观察６一ＢＡ与ＮＡＡ组合对离体　

叶片愈伤组织诱导的影响。６一ＢＡ浓度分别设置为　

０．５ｍｇ／Ｌ、１．Ｏｍｇ／Ｌ、２．０ｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓度设为０．５ｍｇ／Ｌ、　

１．０ｍｇ／Ｌ、２．Ｏｍｇ／Ｌ，采用完全区组实验。按表１进行实　

验，２５ｄ后统计结果。　

１．２．２　６一ＢＡ与２，４一Ｄ组合对离体叶片愈伤组织诱导　

影响的研究　将离体叶片切去叶基部和叶尖部，切割成　

适当大小（Ｏ．５　ｃｍ×０．５　ｃｍ），接种到培养基上进行培养观　

察，以ＭＳ为基本培养基附加不同浓度的６一ＢＡ和２，４一　

Ｄ进行实验，观察６一ＢＡ与２，４一Ｄ组合对离体叶片愈伤　

组织诱导的影响。６一ＢＡ浓度分别设置为０．５ｍｇ／Ｌ、　

１．０ｍｇ／Ｌ、２．Ｏｍｇ／Ｌ，ＮＡＡ浓度设为０．５ｍｇ／Ｌ、１．Ｏｍｇ／Ｌ、　

２．０ｍｇ／Ｌ，采用完全区组实验。按表２进行实验，２５ｄ后统　

计结果。　

度，节省繁殖空间是近年来的热门话题　。本实验以试管　

苗叶片为外植体进行中国樱桃愈伤组织的诱导研究，拟为　

中国樱桃优良品种的快繁和品种的改良奠定一定的理论　

基础。　

１材料和方法　

１．１材料

１．２方法　

中国樱桃试管苗叶片。　

１．２．３　叶片的不同部位对愈伤组织诱导影响的研究将　

１．２．１　６一ＢＡ与ＮＡＡ组合对离体叶片愈伤组织诱导影　

叶片分为叶尖部、叶中部、叶基部作为外植体，进行愈伤组　

织诱导效果的研究。外植体分别接种于ＭＳ＋２．Ｏｍｇ／Ｌ　２，　

响的研究　在超净工作台上将离体叶片切去叶基部和叶　

基金项目：安徽省教育厅优秀人才项目（２００７ＪＱ１　１０８）；安徽科技学院引进人才基金（ＺＲＣ２００６８５）。　

作者简介：彭丽萍（１９７８一），女，河南洛阳人，讲师，主要从事植物组织培养的教学与研究。　收稿日期：２０１０—０７—２１　

５２　安徽农学通报，Ａｎｈｕｉ　Ａ　．Ｓｃｉ．Ｂｕｌ１．２０１０，１６（１７）　

４一Ｄ＋２．０ｍｇ／Ｌ　６一ＢＡ和ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ　ＮＡＡ＋２．０ｍｇ／Ｌ　

曲现象，随着培养时间的延长从叶片切口处首先形成愈伤　

组织，随后整个外植体逐渐完全愈伤化，但不同的激素组　

合诱导外植体形成愈伤组织的时间不同。６一ＢＡ与２，４　

一

６一ＢＡ培养基上。按表３进行实验，２０ｄ后统计结果。　

１．２．４　不同光照时间对愈伤组织诱导影响的研究　以　

叶尖部、叶中部、叶基部（包括部分叶柄）为外植体，观察　

Ｄ组合所形成的愈伤组织为结构致密的颗粒状且愈伤　

不同时间的暗处理对叶片不同部位愈伤组织诱导的影响。　

暗处理时间分别为Ｏｄ，５ｄ，７ｄ，９ｄ，培养基为ＭＳ＋２．０ｍｇ／Ｌ　

２，４一Ｄ＋２．０ｍｇ／Ｌ　６一ＢＡ。按表４进行实验，２０ｄ后统计　

结果。　

组织的颜色为黄白色，部分愈伤组织颜色为粉红色（见图　

ｌｃ），随着培养时间的延长，在愈伤组织诱导的同时也伴　

随发生不定根诱导现象。表２表明，６一ＢＡ与２，４一Ｄ组　

合诱导愈伤组织的形成效果更好，愈伤组织诱导率更高，　

且诱导时间短。高浓度的６一ＢＡ和低浓度的２，４一Ｄ组　

本试验培养条件均为：温度２５±３℃、光照１５００～　

２０００　Ｉｘ（每天光照１４　ｈ），培养基附加０．６５％的琼脂粉和　

３％的蔗糖，ｐＨ值５．８。　

２结果与分析　

２．１　６一ＢＡ与ＮＡＡ组合对离体叶片愈伤组织诱导的影　

响以ＭＳ为基本培养基附加不同浓度的６一ＢＡ与ＮＡＡ，　

配制成多种培养基进行实验，筛选诱导效果好的培养基。　

外植体接种培养３ｄ后离体叶片有不同程度增大效应，随　

着培养时间的延长从叶片切口处首先形成愈伤组织，随后　

整个外植体逐渐完全愈伤化，但不同的激素组合诱导外植　

体形成愈伤组织的时间和效果不同，６一ＢＡ与ＮＡＡ组合　

所形成的愈伤组织为黄绿色且结构比较疏松，部分愈伤组　

织颜色为粉红色（见图ｌａ），随着培养时间的延长，在愈伤　

组织诱导的同时伴随有不定根诱导现象（见图１ｂ）。表１　

表明，不同浓度的植物生长调节剂组合对愈伤组织的诱导　

存在有一定的影响。高浓度６一ＢＡ与低浓度ＮＡＡ组合，　

高浓度ＮＡＡ与低浓度６一ＢＡ组合，低浓度６一ＢＡ与低浓　

度ＮＡＡ组合时，在一定程度上都可诱导出愈伤组织，愈伤　

组织多数从叶片伤口处产生，完全愈伤化时间长，诱导过　

程中外植体易褐化。６一ＢＡ与ＮＡＡ浓度较高且相近时，　

愈伤组织的诱导效果明显，尤为６一ＢＡ和ＮＡＡ浓度均为　

２．０　ｍｇ／Ｌ时效果最好，诱导率达６０．７％。　

表１不同浓度组合（６一ＢＡ和ＮＡＡ）对中国樱桃离体　

叶片愈伤组织诱导的影响　

２．２　６一ＢＡ与２。４一Ｄ组合对离体叶片愈伤组织诱导的　

影响以ＭＳ为基本培养基附加不同浓度的６一ＢＡ与２，４　

一

Ｄ，配制成多种培养基进行实验，筛选诱导效果好的培　

养基。外植体接种培养３ｄ后离体叶片有不同程度增大卷　

合，形成愈伤组织的效果并不理想，当２种激素浓度相近　

或相等时诱导愈伤组织效果好，诱导率高。当培养基组合　

为Ｍｓ＋２．０ｍｇ／Ｌ　２，４一Ｄ＋２．０ｍｇ／Ｌ　６一ＢＡ，诱导率　

诀７４．０％　

表２不同浓度组合（２，４一Ｄ和６一ＢＡ）对中国樱桃　

叶片愈伤组织诱导的影响　

２．３叶片不同部位对愈伤组织诱导的影响影响愈伤组　

织形成及生长的因素很多，如激素组合、浓度配比、外植体　

取材部位的不同、光照等　］。以ＭＳ为基本培养基附加浓　

度均为２．０ｍｇ／Ｌ的６一ＢＡ与２，４一Ｄ、６一ＢＡ与ＮＡＡ，配　

制成２种培养基。将叶片分为叶尖部、叶中部、叶基部进　

行培养，筛选出诱导愈伤组织的最佳叶片部位。由表３可　

知，叶片不同部位对愈伤组织的诱导影响明显，其中叶片　

中部比叶尖部诱导效果好，叶片基部比叶片中部诱导效果　

好，叶片基部诱导愈伤组织出现的时间短，叶基部在诱导　

过程中，叶柄处先长出愈伤组织（见图ｌｄ），２０ｄ后诱导率　

可达１００％　

表３　叶片不同部位对愈伤组织诱导的影响　

叶的不同部位　爵　６　－　Ｂ石Ａ瓦，Ｎ　ＡＡ　再　两　暑至６－　ＢＡ　　，２甭，４　－爵Ｄ辱　

２．４暗培养对愈伤组织诱导的影响　外源激素，外植体　

部位不同影响植物愈伤组织的形成，光照对愈伤组织的诱　

导及器官的发生也有较大的影响，在多种植物中暗培养可　

以促进愈伤组织的形成　。在接种后分别进行暗处理　

０ｄ，５ｄ，７ｄ，９ｄ，然后转入光下培养，观察愈伤组织的诱导状　

１６卷１７期　彭丽萍等　中国樱桃离体叶片愈伤组织诱导的研究　５３　

况。表４表明，经过不同程度的暗培养，对叶片不同部位　

最明显，可明显提高愈伤组织的诱导率和缩短形成愈伤组　

织的时间；对于叶片基部，暗处理不能明显的提高诱导　

愈伤组织的诱导有一定的影响，当暗培养天数为５ｄ时诱　

导效果最理想，暗培养时间过长外植体易黄化，不利于愈　

效果。　

伤组织的诱导，暗培养处理对叶尖部、叶中部的作用效果　

表４不同光照对愈伤组织诱导的影响　

３讨论与结论　

本研究表明，影响中国樱桃离体叶片愈伤组织诱导的　

因素很多。以ＭＳ为基本培养基，研究不同的激素种类与　

浓度对中国樱桃离体叶片愈伤组织诱导的影响。实验证　

明６一ＢＡ和２，４一Ｄ组合对愈伤组织诱导的效果最好，当　

一　

６一ＢＡ和２，４一Ｄ的浓度分别为２．０ｍｇ／Ｌ时愈伤组织的　

诱导率最高可达７４．０％。６一ＢＡ与ＮＡＡ组合也可诱导中　

国樱桃离体叶片形成愈伤组织，但出现愈伤组织的时间较　

晚，诱导强度较弱。不同的激素组合所诱导的愈伤组织形　

态有所差别，６一ＢＡ和２，４一Ｄ组合诱导的愈伤组织为黄　

图１　中国樱桃叶片愈伤组织诱导情况　

绿色颗粒状，６一ＢＡ与ＮＡＡ组合所诱导的愈伤组织结构　

注：ａ　６～ＢＡ与ＮＡＡ诱导叶片形成愈伤组织；ｂ．愈伤组织诱导时的　

比较疏松颜色浓绿，２种激素组合在诱导愈伤组织的同时　

生根现象；Ｃ．６一ＢＡ与２，４一Ｄ诱导形成愈伤组织；ｄ．叶柄处形成愈　

都伴随有不定根诱导效应，在愈伤组织基部形成白色的不　

伤组织。　

定根，这可能是培养基中生长素浓度高引起的。　

参考文献　

外源激素影响着外植体能否形成愈伤组织，叶片的不　

［１］唐晓杰，孟庆繁，杨振国，等．酸樱桃组织培养及快速繁殖技术研　

同部位诱导愈伤组织的效果不同，实验结果表明中国樱桃　

究［Ｊ］．北华大学学报（自然科学版）２００４，５［４］：３５５—３５７．　

叶片基部诱导愈伤组织的效果最好。该结论与师校欣等　

［２］李浚明．植物组织培养教程［Ｍ］．北京农业大学出版社，１９９２：　

对甜樱桃离体叶片愈伤组织诱导的结论相符　。本试验　

３２４—３４９．　

证明了中国樱桃的叶基部比叶的其他部位更易诱导愈伤　

［３］黄伟江，刘庆忠，孙清荣，等．樱桃离体叶片高效再生的影响因素　

组织产生，诱导率达到百分之百，愈伤组织生长速度也快，　

［Ｊ］．农业生物技术学报，２００６，１４（５）：８２２—８２３．　

［４］Ｊ　ＥＭＥＳ　Ｄ　Ｊ，ＰＡＳＳＥＹ　Ａ　Ｊ．Ｆａｃｔｏｒｓ　ａｆｆｅｃｔｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ　ｐｌａｎｔ　

这可能是因为叶柄处细胞分化程度相对较低，故较易　

ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎｇ　ｆｒｏｍ　ａｐｐｌｅ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｉｎ　ｖｉｔ　ｅｒ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ　

诱导。　

，

１９９８，１３２：１４８—１５４．　

研究表明，弱光比强光更易于诱导细胞分裂　。　。本　

［５］师校欣，杜国强，马宝煜，等．甜樱桃砧木离体叶片愈伤组织诱导　

试验使用上２次试验所得到诱导愈伤组织的最佳培养基，　

及不定芽再生［Ｊ］．果树学报，２００６，２３（４）：５３８—５４１．　

分别对叶尖部、叶中部、叶基部同时给以０ｄ，５ｄ，７ｄ，９ｄ的　

［６］ＭＩＣＨＡＬＣＺＵＫ　Ｂ，ＭＩＣＨＡＬＣＺＵＫ　Ｌ　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｌｉｇｈｔ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｏｎ　

不同暗处理进行培养，然后转至光照下培养。结果表明经　

ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔｌｅｔ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　Ｐｅｔｕｎｉａ　Ｒｅｖ—　

过５ｄ暗处理诱导愈伤组织效果最佳，出现愈伤组织的时　

ｏｌｕｔｉｏｎ（Ｓｕｒｆｉｎｉａ　ｔｙｐｅ）［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｏｒｔｉｃｕｈｕｒａｅ，２０００（５３０）：３９７　

间短，愈伤组织生长速度快。随暗处理时间延长效果出现　

４０１．　

下降趋势，暗处理对叶尖部和叶中部诱导效果明显，叶基　

［７］ＳＥＯＮＪ，ＣＵＩ　ＹＹ，ＫＯＺＡＩ　Ｔ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｇｒｏｗｔｈ　ｃｏｎ—　

部暗处理对愈伤组织的诱导没有明显效果。本试验以中　

ｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｎ　ｐｈｏｔｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ　ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｏｆ　Ｒｅｈｍａｎｎｉａ　

国樱桃离体叶片为外植体诱导愈伤组织获得成功，进一步　

ｇｌｕｔｉｎｏｓａ　ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ａｃｃｌｉｍａｔｉｚａｔｉｏｎ　ｐｅｒｉｏｄ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓ—　

ｓｕｅ　ａｎｄ　Ｏｒｇａｎ　Ｃｕｌｔｕｒｅ，２０００，６１（２）：ｌ３５—１４２．　

诱导愈伤组织进行器官分化是下一步努力的方向。　

（责编：张琪琪）