2024年5月4日发(作者：)

病毒核酸检测可疑或阳性结果处

置流程

1.目的

规范病毒核酸检测实验室对新冠核酸可疑或阳性结果复检

及报告处置流程,确保检测结果的准确、及时。

2.适用范围

适用病毒核酸检测可疑或阳性结果的复测或复核处置。

3.职责

3.1检测人员:熟悉本实验室开展的病毒检测项目的样本采

集、保存、运输、检测、结果报告、上送等技术要求,并按操

作规程做好样本的接收、登记、处理、检测、保存和运送工

作。

3.2复核人员:负责检测结果的分析、核实,加强检测过程中的

质量监督、监控。

3.3实验室负责人:加强实验室检测质量控制

3.1检测人员:熟悉本实验室开展的病毒检测项目的样本采

集、保存、运输、检测、结果报告、上送等技术要求,并按操

作规程做好样本的接收、登记、处理、检测、保存和运送工

作。

3.2复核人员:负责检测结果的分析、核实,加强检测过程中的

质量监督、监控。

3.3签发人员或实验室负责人:加强实验室检测质量控制和生

物安全管理,确保实验室检测人员按照规范进行工作,组织开

展结果分析和样本复采、复检、上送,及时报告结果。

4.操作程序

4.1处置流程启动条件

当实验室检测人员在检测过程中发现有样本新冠病毒核酸

orflab/N双靶标基因强阳性、弱阳性、灰区或单靶基因阳性,

立即启动该处置流程。

4.2处置步骤

4.2.1首先应立即分析本次实验结果成立与否当以下条件均

符合时,本次实验室结果成立

①试剂盒本身的阴性对照和阳性对照扩增结果图与Ct值均

应符合试剂盒说明书的要求;

②批次同步检测的弱阳性质控有典型S扩增并且Ct值在控,

阴性质控对照无扩增;

③样本的人源内参靶标有正常扩增(如样本新冠双靶基因强

阳性扩增,部分试剂盒的人源内参可能存在弱扩增或无扩增

的现象)。

当以上对照或质控异常时,本次实验结果不可信。

4.2.2正确判读Ct值

应根据扩增曲线与读数Ct值相结合进行判读,扩增曲线应为

明显S型曲线,当扩增曲线起峰的位点的Ct值与仪器生成读

数的Ct值基本一致时,可按照该Ct值读取结果当扩增曲线起

峰的位点的Ct值与仪器生成读数的CT值偏差较大时,需将该

靶标基线位置整至至阴性对照之上或持平,在扩增曲线刚起

峰的拐点位置读取Ct值。

4.2.3排查是否污染

当发现样本的新冠病毒核酸检测结果阳性或疑似阳性时,首

先要分析排查是否污染,考量样本人群来源、标本类型、扩增

曲线、Ct值,加样和加模板过程中与阳性对照的相对位置,当

批次、当天或近期有没操作强阳性样本或强阳对照情况,扩增

过程中及实验结束后有没发生PCR反应产物管裂开、爆管溢

岀等因素,经实验室经验丰富的检测人员或主管或负责人综

合分析判断。无污染:当样本新冠 orflab/N双靶基因结果呈

典型的S型扩增曲线,Ct值低于阳性对照(扩增曲线在阳性对

照之前)时,如近期无操作过强阳性标本或对照、无PCR反应

产物溢出等异常情况,且样本加样及加模板位置均离阳性对

照较远,操作过程符合规范要求,交叉污染的可能性较低,同时

如标本来源于高风险人群或密接者,标本为鼻咽拭子,此类阳

性结果发生污染的几率很小,基本可排除污染的可能性。可能

污染:当样本新冠 ORFlab/N双靶基因结果呈弱阳性扩增曲线

或单靶基因阳性或处于灰区,Ct值等于或大于阳性对照(扩增

曲线在阳性对照之后),且样本加样及加模板位置均离阳性对

照较近,加上检测人员熟练程度不高,操作不够规范,存在交叉

污染的可能,如近期实验室人员曾操作过强阳性标本或对照、

PCR反应管产物溢出等异常情况,存在环节气溶胶污染的可

能,而标本来源于低风险人群,此类样本的阳性结果发生污染

的可能性较高

4.2.4样本复采

对于可疑阳性或阳性结果,均需高度重视,立即由经验丰富、

技术熟练的采样人员重新采集符合要求的样本,旋紧管盖,三

层包装好,用生物安全转运箱立即送回实验室

①需同时采集鼻咽拭子、咽拭子样本式各两份,并送阳春市疾

控中心及阳春市妇幼保健院平行检测，用于核酸复查工作;

②必须首要采集鼻咽拭子,使用专用的、细软杄的植绒拭子,

确保拭子到达鼻咽部位,旋转拭子并停留一定的时间,把拭子

放入病毒保存管,在拭子折点处折断,弃去尾部,手接触部位避

免污染,旋紧管盖。

③采集咽拭子时,可分别用两根拭子擦拭咽后壁、两腭弓及扁

桃体,来回涂抹次数及停留的时间可适当增加,把拭子放入病

毒保存管,在拭子折点处折断,弃去尾部,手接触部位避免污染,

旋紧管盖。

4.2.4样本复测和报告

对于可疑或阳性结果的标本,实验室需安排技术和意识过硬

的检测人员重新提取原样和新样本的核酸,用2种以上质量

可靠的核酸检测试剂进行复测,灵敏度小于500拷贝/ML新冠

荧光PCR检测试剂,通过人员比对、试剂比对、仪器比对等形

式加强质量控制。检测前处理时,检测人员需对严格核对复采

样本信息,做好三级防护、在二级生物安全柜中充分振荡病毒

保存管,再双人在生物安全柜中开盖、取样、加样,规范和小

心操作,尽最大可能避免样本交叉污染。扩增检测时,至少使

用双试剂、平行样测试当重新采集的样本和原样复测结果依

然新冠双靶标基因阳性、弱阳性、灰区、或单靶基因阳性,

经实验室项目负责人或主管或实验室科主任分析审核无误

后,向单位相关科室报告。并立即把原样本、重新采集的(鼻

咽、口咽、）

4.2.5样本上送市CDC

各医疗卫生机构应立即通过院感或医务科与阳春市CDC联

系、报告个案情况,并立即把重新采集的(鼻咽、口咽)标本和

原样本上送阳春市CDC实验室每份样本需用独立包装袋封装,

按A类感染物质三层包装安全运输。

5病毒实验室检测结果的判断依据

5.1根据《病毒肺炎防控方案(第七版)》之附件6实验室检测

技术指南,实验室确认阳性病例需满足以下两个条件中的一

个

(1)同一份标本中病毒2个靶标(0RF1ab、N)实时荧光RT-PCR

检测结果均为阳性。如果出现单个靶标阳性的检测结果,则需

要重新采样,重新检测。如果仍然为单靶标阳性,判定为阳性。

(2)两种标本实时荧光RT-PCR同时出现单靶标阳性,或同种类

型标本两次采样检测中均出现单个靶标阳性的检测结果,可

判定为阳性。核酸检测结果阴性不能排除病毒感染,需要排除

可能产生假阴性的因素,包括:样本质量差,比如口咽等部位的

呼吸道样本;样本收集的过早或过晩;没有正确的保存、运输

和处理样本;技术本身存在的原因,如病毒变异、PCR抑制等。

6.支持性文件

6.1《关于印发病毒肺炎防控方案(第七版)通知》联防联控机

制综发[2020]229号

6.2医疗机构病毒核酸检测工作手册(试行第二版)

病毒核酸检测可疑或阳性结果处

置流程图

可疑/单基因/双基

因阳性

实验室当班人员立

刻上报科主任

科主任确认情况情况

类型

初筛阳性

阴性

技术问题/污

染

立刻上报院新

冠防控小组/医

务科/院感科

（不分先后）

签发报告

查找原因，排

除情况

复采鼻咽、咽拭子

标本各3份复核

（送疾控、妇幼或

人医）

上报市核酸

检测专班