2024年4月16日发(作者：)
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维护和使用手册
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XBridge
色谱柱
非常感谢您选择Waters XBridge™色谱柱。XBridge™填料设计精良，
目录
能在酸性和碱性流动相条件下获得良好的峰形、达到高柱效并展
I.
现出色的稳定性。所有XBridge™填料均由通过cGMP和ISO 9001:
2000认证的工厂使用超纯试剂生产。每批XBridge™填料都采用酸
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性、碱性和中性分析物进行了色谱测试，结果均符合严格的合格
标准，可确保色谱柱具有出众的重现性能。每根色谱柱都经过单
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独测试，并随附性能测试色谱图以及合格证书。
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XBridge™色谱柱1
入门指南
a.色谱柱安装
色谱柱平衡
初始柱效测定
色谱柱使用
a. 保护柱
样品制备
c. pH操作限值
溶剂
压力
温度
放大/缩小等度方法
故障排除
色谱柱清洗、再生和储存
清洗与再生
储存
将色谱柱连接到HPLC
色谱柱接头和系统管路注意事项
测量系统谱带展宽体积和系统方差
测量梯度延迟（或延迟体积）
其他信息
使用窄径（3.0 mm内径）色谱柱
谱带展宽体积对2.1 mm内径色谱柱性能的影响
未优化和优化LC/MS/MS系统对比：
系统配置更改建议
沃特世小粒径(2.5 µm)色谱柱 - 快速色谱分离
e. XBridge HILIC色谱柱入门
f. XBridge Amide色谱柱入门
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维护和使用手册
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I. 入门指南
每根XBridge™色谱柱都附带一份COA报告和一幅性能测试色谱图。
COA报告为XBridge™色谱柱中所用的填料批次所特有，包括批号、
未键合颗粒和键合填料分析结果，以及色谱结果和检测条件。
性能测试色谱图提供每根色谱柱的以下信息：批号、色谱柱序
列号、USP理论塔板数、USP拖尾因子、保留因子以及色谱条件。
这些数据应妥善保存，以备将来参考。
b. 色谱柱平衡
XBridge™色谱柱出厂时保存于100%乙腈中。在更换色谱柱的流动
相之前，请务必确保流动相的兼容性。请用至少10倍柱体积的流
动相平衡色谱柱（请参阅表1中的空色谱柱体积）。
为避免流动相缓冲液在色谱柱或系统中析出，请使用5倍柱体积
的水/有机溶剂混合溶液冲洗色谱柱，其中有机溶剂的含量应与
所用缓冲流动相相同或更低。（例如，使用60%甲醇水溶液冲洗
色谱柱和HPLC系统，然后再引入60%甲醇/40%缓冲液组成的流
动相。）
对于XBridge HILIC色谱柱，用50倍柱体积的50:50乙腈:水溶液进
行冲洗。对于XBridge HILIC Amide色谱柱，用50倍柱体积的60:
40乙腈:水溶液进行冲洗。在首次进样之前，用20倍柱体积的流
动相（初始条件）平衡色谱柱（请参阅表1中的色谱柱体积）。
请参阅“XBridge HILIC色谱柱入门”或“XBridge HILIC Amide色谱
柱入门”获取详细信息。
a. 色谱柱安装
注：下述步骤给出的流速适用于粒径5 µm、内径4.6 mm的典型
色谱柱。用户可根据所安装XBridge™色谱柱的内径、柱长、粒径
和柱压相应地提高或降低流速。请参阅“放大/缩小等度分离方法”
部分，了解色谱柱内径和/或柱长改变时的流速计算方法。有关
连接HPLC的详细信息，请参阅“将色谱柱连接到HPLC”部分。
1. 灌注泵系统，排出含缓冲液的流动相，然后将色谱柱的入口
端连接至进样器出口。色谱柱识别标记上的箭头指示了正确
的溶剂流向。
2. 用100%有机流动相（甲醇或乙腈）冲洗色谱柱，泵流速设
置为0.1 mL/min，并在5 min内增加至1 mL/min。
3. 当流动相可从色谱柱出口自由流出时，停止液流并将色谱柱
出口连接至检测器。这样能防止空气进入检测系统，使系统
更快达到基线平衡。
4. 按照步骤2所述逐渐增加流速。
c. 初始柱效测定
1. 在开始使用色谱柱分析样品前先测量色谱柱的柱效，沃特世
建议选用合适的待测物测试柱效，如采用色谱柱性能测试报
告中的样品和条件(参见柱盒内的报告)。
2. 计算理论塔板数，用这个数据作为对照，定期监控色谱柱的
柱效。
的性能变化。由于不同仪器的管线连接、操作环境、系统电
5. 一旦柱压和基线达到稳定状态，即可继续进行下一部分操作。
3. 随着色谱柱的使用，需要定期做同样的测试以便追踪色谱柱
注：如果流动相中含有低浓度添加剂（例如离子对试剂），那么
完成平衡可能需要100-200倍柱体积的流动相。此外，当流动相
中含有甲酸盐时（如甲酸铵、甲酸等），初始柱平衡时间也可
能较长。
路、所使用的溶剂和试剂的质量、色谱柱的条件以及操作者
的技术都有可能不同，因此再不同的HPLC系统上测试的结
果可能会有一些差别。
XBridge™色谱柱2
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