2024年3月15日发(作者:)
激光共聚焦显微镜的原理与应用范围讲解
激光共聚焦显微镜的原理与应用范围
激光扫描共聚焦显微镜是采用激光作为光源,在传统光学
显微镜基础上采用共轭聚焦原理和装置,并利用计算机对所观
察的对象进行数字图象处理的一套观察、分析和输出系统。把
光学成像的分辨率提高了30%~40%,使用紫外或可见光激发
荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,在
亚细胞水平上观察生理号及细胞形态的变化,成为形态学,分
子生物学,神经科学,药理学,遗传学等领域中新一代的研究
工具。
1激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)的原理
从基本原理上讲,共聚焦显微镜是一种现代化的光学显微
镜,它对普通光镜从技术上作了以下几点改进:
1.1用激光做光源因为激光的单色性非常好,光源波束的
波长相同,从根本上消除了色差。
1.2采用共聚焦技术在物镜的焦平面上放置了一个当中
带有小孔的挡板,将焦平面以外的杂散光挡住,消除了球差;并进
一步消除了色差
1.3采用点扫描技术将样品分解成二维或三维空间上的
无数点,用十分细小的激光束(点光源逐点逐行扫描成像,再通过
微机组合成一个整体平面的或立体的像。而传统的光镜是在场
光源下一次成像的,标本上每一点的图像都会受到相邻点的衍
射光和散射光的干扰。这两种图像的清晰度和精密度是无法相
比的。
1.4用计算机采集和处理光号,并利用光电倍增管放大号
图
在共聚焦显微镜中,计算机代替了人眼或照相机进行观察、
摄像,得到的图像是数字化的,可以在电脑中进行处理,再一次提
高图像的清晰度。而且利用了光电倍增管,可以将很微弱的号
放大,灵敏度提高。由于综合利用了以上技术。可以说LSC
M是显微镜制作技术、光电技术、计算机技术的完美结合,是
现代技术发展的必然产物。
2LSCM在生物医学研究中的应用
现在,一台配置完备的LSCM在功能上已经完全能够代
替以往的任何一种光学显微镜,它相当于多种制作良好的经常
利用光学显微镜的有机组合,如颠倒光学显微镜、紫外线显微
镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜(PH、微分干
涉差显微镜(DIC等,因此被称为万能显微镜,通过它所获得的
精密图像可使其他的显微镜图像无比逊色。
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