2024年5月1日发(作者:最新净水器排名前十名)
QX100简易操作流程
(以英文原版操作手册为准)
1. 先打开电脑,再打开QX100 Droplet Reader电源,在使用前需预热至少30分钟;
2. 配制探针法定量反应体系,振荡混匀,离心除气泡,注意20ul体系中所加样本核酸含量不要超过规定检
测范围(1~100000拷贝片段化核酸或者1~20000拷贝较完整基因组DNA),如完整的人类基因组DNA不
要超过66ng/20ul,可提前用限制性内切酶处理样本可提高检测浓度;
3. 将一个新的DG8 cartridge放入holder中,注意缺口方向;
4. 将20ul样品反应体系加入到DG8 cartridge中间一排的8个孔内,不足8个样品时用20ul 1×buffer control
补足,建议使用Rainin的8通道20ul排枪和20ul枪头(不能用200ul枪头),加样时枪头接近孔一侧底
部,与侧壁呈大约15°角,缓慢打出液体,打出一部分后慢慢提升枪头位置再打出余下液体,不要将枪
按至超过第一档位置以免引入气泡;
5. 在DG8 cartridge最底下一排8个孔中各加入70ul微滴生成油(DG Oil),同样不能有空着的孔;
6. 盖上胶垫(gasket),注意两边的小孔都要钩牢;
7. 将以上holder轻轻地平稳放置于微滴生成仪中,开始生成微滴,注意仪器上指示灯状态,一般2分钟之
内完成;
8. 微滴生成于cartridge最上面一排孔内,建议使用Rainin的8通道P‐50排枪和200ul枪头小心缓慢吸取,
调整吸取体积为40ul,将holder放平,枪头以与孔壁呈30~45°角放入,轻触孔底,约5秒吸取40ul,
再同样缓慢地打入96孔板相应位置孔内(约5秒),枪头贴近孔壁接近孔底,注意封上盖以防油挥发,
每次弃去已使用过的cartridge和胶垫;
9. 转移油滴进入96孔板内完成后,用预热好的PX1热封仪对其进行封膜(膜亮面朝上,暗面向下),推荐
的运行程序为:180℃,10s,无需颠倒方向二次封膜;
10. 封好膜之后应该在30分钟内进行PCR反应,或者放于4℃冰箱4小时之内进行PCR,可在任意一台96
孔PCR仪上完成,注意升降温速度≤2.5℃/s。推荐反应条件:
1. 95℃,10min;
2. 94℃,30s
40循环
Tm(退火温度按优化摸索得来的条件设置),60s;
3. 98℃,10min;
11. 查看微滴读取仪上状态指示灯指示是否正常(不同说明书上稍有不同);
12. 将之前完成PCR的96孔板放入plate holder中组装好,注意板斜角方位,如下图所示:
13. 组装好之后轻轻地平稳放入微滴读取仪中,如图:
14. 打开QuantaSoft软件,建议每次实验之前做一次Flush System,若一周以上未使用建议先做一次Prime
再做Flush System。之后对96孔板中样品信息进行Setup,主要是提供实验名称、实验类型(ABS、CNV、
RED)、assay以及探针信息等,完成后即可进行Run,结束后结果会被自动Analyze,人工核实后保存结
果,即完成了一次QX100实验。
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