2024年4月14日发(作者：1500元以内的手机推荐)

DNA Polymerase I（

）

使 用 说 明 书

Code No.： D2130

包 装：

DNA Polymerase I（3～6 U/μl）

10×DNA Polymerase I Buffer

250 Units

1 ml

保 存：

-20℃

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制品说明

DNA Polymerase I（

）

是由带有编码

DNA Polymerase I基因的大肠杆菌精制而成的，

分子量约为109,000，最适pH7.4。在模板和引物（DNA或RNA）存在的条件下，以dNTP作底

物，沿5′→3′方向合成与模板互补的DNA。此外，本酶还具有双链特异性的5′→3′外切核酸酶

活性以及单链特异性的3′→5′外切核酸酶的活性。

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酶贮存溶液

KPB缓冲液（pH6.5）

DTT

Glycerol

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起 源：

Escherichia coli

carrying the plasmid which encodes the gene of

Pol

I。

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活性定义

以合成的Poly d（A-T）DNA为模板/引物，在37℃、pH7.4的条件下，30分钟内使10 nmol的

全核苷酸掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

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纯 度

10 U的本酶和1 μg的Closed circular（RFI）pBR322 DNA在37℃下反应1小时，DNA的电泳

谱带不发生变化。

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用 途

1） 与DNase I（TaKaRa Code：D2210）一起使用，进行切口平移（Nick translation）。

2） 通过Okayama-Berg法合成cDNA的第二条链。

50 mM

1 mM

50 %

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使用注意

1） 酶在保存条件下半年内稳定，稀释也不失活，但剧烈搅拌会使酶失活。

2） 不含Endonuclease活性，单独使用不表现切口平移活性。

3） 由于同DNA有较强的亲和性，过量使用易发生凝集作用（Aggregation），会使反应不能充分进行。

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添附Buffer组成（保存：-20℃）

10×DNA Polymerase I Buffer*

Tris-HCl（pH7.8） 500 mM

MgCl

2

100 mM

mM DTT 1

BSA 250 μg/ml

* BSA在-20℃下易产生沉淀，应尽量避免多次反复冻融。短

期使用请在4℃下保存。产生稍许沉淀不影响反应效果。

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使用例

切口平移反应

1. 在微量离心管中配制下列反应液。

模板DNA溶液

10×

DNA Polymerase I Buffer

dNTP Mixture（dATP，dGTP，dTTP各0.1 mM）

111 TBq/mmol [γ-

32

P]dCTP

DNA Polymerase I（4 U/μl）

DNase I（0.0004 U/μl）*

2

0.05～1 μg

4 μl

4 μl

10 μl*

1

1 μl

1 μl

灭菌蒸馏水 up to 40 μl

*1）10 μl=3.7 MBq，100 μCi。

*2）DNase I的稀释液组成：150 mM NaCl。稀释后请立即使用，稀释

的酶液不能保存。

2. 15℃反应2小时。

3. 80℃保温5～10分钟停止反应。

4. 取适量作为杂交反应的探针使用（若有必要，可通过凝胶过滤或乙醇沉淀除去未掺入的dCTP）。

V2008.11