2024年2月25日发(作者：创维电视机开不了机是什么原因)
三、纯化方法与应用指南
表1: HAP、ULTRA PAGE和HPLC三种纯化方法的特点比较
纯化方式
纯化原理
采用纯化柱上特异性树脂对DNA 片段上保留 5'端最后HAP
一个碱基上的 DMT有亲和吸附作用从而达到分离纯化。
采用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，基于凝胶的尺寸和DNA的构象原理，可以分离相差ULTRA
PAGE
一个碱基的引物，从而达到对全长产物和失败序列进行分离，然后从凝胶中回收目的DNA，同时配合质谱对DNA进行定性分析，以保证回收片段的正确性。
优缺点
多快好省的特点。
纯度可达到80~90%，
但是对长于40碱基以上的片段纯化效果不好。
纯度好，准确性高，对于较长序列（40-120），制品纯度保证90~95%，相比与其他两种方法，ULTRA PAGE纯化对长链引物(大于50mer) 的纯化特别有效，缺点需要跑电泳并切胶回收，费时费力。
该法自动化程度高、省人力；采用高效液相色谱的原理，依据DNA的疏水性来分离产物的。合成粗产物中不同长HPLC
度的 DNA 片段的疏水性不同，一般来说较长的片段具有较强的疏水性，同时配合以保证回收片段的正确性。
对于较长片段(大于89 mer)，纯化效果不如ULTRA PAGE方法好。尽管对于较长序列，但如果实验对制品的纯度要求非常高， HPLC与ULTRA
PAGE双重精制会使效果更本较高。
应用
可以满足杂交探针、测序、常规PCR（不再做进一步克隆实验）等用途。
可适于多重PCR、亚克隆、点突变、各种探针，或用于PCR克隆测序、定点突变等。
因其HPLC产品的纯度非常高，使用本法纯化的DNA制品可适用于各种基因工程实验。主要用于PCR克隆、定点突变、人工合成基因、长链和修饰引物的纯化。
质谱对DNA进行定性分析，佳，其弱点是纯化通量小、成对40 mer以下的DNA制品， HPLC是最好的纯化方法，其次是ULTRA PAGE； 而对40 mer以上的DNA制品ULTRA PAGE纯化要优于单纯的HPLC纯化。所以，如您要对PCR产物克隆后测序，一定要选择ULTRA PAGE纯化或HPLC纯化的引物。
根据不同的实验要求，您可以选用以下适合的纯化方法，具体见表2。
表2: HAP、ULTRA PAGE和HPLC三种纯化方法的应用
应用
普通PCR/RT-PCR
普通PCR/RT-PCR
多重PCR/定量PCR
测序
诊断PCR扩增
引物长度要求
< 40 base
>40base
根据实验要求定
根据实验要求定
根据实验要求定
纯化方法要求
HAP
ULTRA PAGE
ULTRA PAGE, HPLC
HAP
HAP, ULTRA PAGE
亚克隆，点突变
基因构建
全基因合成
反义核酸
修饰/标记引物
PCR产物用于克隆表达研究或基因重组等
根据实验要求定
根据实验要求定
根据实验要求定
根据实验要求定
根据实验要求定
根据实验要求定
ULTRA PAGE, HPLC
ULTRA PAGE, HPLC
HAP
HPLC
HPLC
ULTRA PAGE, HPLC
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