2024年4月13日发(作者：)

CTAB法原理 CTAB(hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴

化铵)，是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高

离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl)，CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物，只是不能沉

淀核酸。通过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分

离出来。

CTAB提取缓冲液的经典配方

Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏；

EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子，抑制DNase活性；

NaCl 提供一个高盐环境，使DNP充分溶解，在于液相

中； CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；

β-巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除

PVP(聚乙烯吡咯烷酮)是酚的络合物，能与多酚形成一种不溶的络合物质，有效去除多

酚，减少DNA中酚的污染；同时它也能和多糖结合，有效去除多糖。

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？

使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA

联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而

DNA溶于水相。

使用酚的优点：1.有效变性蛋白质；2抑制了DNase的降解作用。缺点：1.能溶解

10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。2.不能完全抑制RNase的活性。

氯仿的作用？

氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。

最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）

用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？

异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减

少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋

白相及下层有机溶剂相维持稳定。

用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？

用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+

中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。

简言之，无论哪种抽提方法，药品的作用基本都是一样的

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TE Buffer 配制： 10 mmol/L Tris-HCl(pH 8.0) 1 mmol/L EDTA(pH 8.0) 因为含有

以上两种物质，所以称为TE。 作用： TE缓冲液是弱碱性,对DNA的碱基有保护性,(DNA

在它是的稳定性较好,不易破坏其完整性或产生开环及断裂),包括提取好的DNA也要放在

TE缓冲液是保存.

抽提DNA去除蛋白质时，怎样使用酚与氯仿较好？

酚与氯仿是非极性分子，水是极性分子，当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时，蛋白质分

子之间的水分子就被酚或氯仿挤去，使蛋白失去水合状态而变性。经过离心，变性蛋白质

的密度比水的密度为大，因而与水相分离，沉淀在水相下面，从而与溶解在水相中的DNA

分开。而酚与氯仿有机溶剂比重更大，保留在最下层。作为表面变性的酚与氯仿，在去除

蛋白质的作用中，各有利弊，酚的变性作用大，但酚与水相有一定程度的互溶，大约10％～

15％的水溶解在酚相中，因而损失了这部分水相中的DNA，而氯仿的变性作用不如酚效

果好，但氯仿与水不相混溶，不会带走DNA。所以在抽提过程中，混合使用酚与氯仿效果

最好。经酚第一次抽提后的水相中有残留的酚，由于酚与氯仿是互溶的，可用氯仿第二次

变性蛋白质，此时一起将酚带走。也可以在第二次抽提时，将酚与氯仿混合（1:1）使用。

为什么用酚与氯仿抽提DNA时，还要加少量的异戊酵？

在抽提DNA时，为了混合均匀，必须剧烈振荡容器数次，这时在混合液内易产生气

泡，气泡会阻止相互间的充分作用。加入异戊醇能降低分子表面张力，所以能减少抽提过

程中的泡沫产生。一般采用氯仿与异戊酵为24：1之比。也可采用酚、氯仿与异戊醇之比

为25：24:1（不必先配制，可在临用前把一份酚加一份24：1的氯仿与异戊醇即成），同

时异戊醇有助于分相，使离心后的上层水相，中层变性蛋白相以及下层有机溶剂相维持稳

定。

呃……能说下具体的改动部分吗？一般来说，改良法是应用于多年生植物组织的DNA

提取，含有较多的酚，多糖，硅质等，棉花和水稻的DNA提取也需要一定的修改。思路

有两个，一方面尽量去除杂质、蛋白和脂类，另一方面加强DNA的沉淀效果。CTAB在高

离子强度的溶液中可以与蛋白质、多糖等物质结合，而不与DNA结合，这里还可以添加

一些还原剂比如β-巯基乙醇来避免褐化物质对DNA的影响。氯仿-异戊醇可以进一步使蛋

白质变性分层并去除脂类。最后用低温预冷的无水乙醇或者异戊醇来沉淀DNA。