2024年4月11日发(作者：)
第16章 Southern杂交技术
根据核酸变性与复性的特性，特定核苷酸序列的单链DNA或RNA能够在一定条件下与具
有互补性的核酸链退火形成双链结构，称之为核酸杂交。将已知的特定核苷酸序列的单链DNA
或RNA进行标记，制成核酸探针，就可以用它检测样品中是否存在同源序列，或确定不同物种
之间的亲缘关系，已成为分子生物学中一类重要的检测手段，在科学研究和实践中具有十分广
泛的用途。它可用于基因组特定DNA序列的定位，测定相关片段的同源性、从cDNA文库、
基因组文库中筛选完整基因等。还可以用于构建DNA分子的酶切图谱和遗传图—指纹分析等。
核酸杂交检测都是在滤膜上进行的，常用的滤膜有尼龙滤膜、硝酸纤维素滤膜等。其基本
过程包括以下几步。首先将待检样品DNA或RNA分子直接点加到滤膜上，或经过凝胶电泳分
离再通过毛细管作用或电导作用被转移到滤膜上，而且是按其在凝胶中的位置原封不动地“吸
印”上去的，这个过程称为核酸印迹（nucleic acid blotting）转移，主要有电泳凝胶核酸印迹
法、斑点和狭线印迹法（dot and slot blotting）、菌落和嗜菌斑印迹法（colony and plaque
blotting）；然后将具有核酸印迹的滤膜同带有放射性标记或其它标记的DNA或RNA探针进行
杂交。最后，经过放射自显影技术或光化学、免疫学技术显示出不同的颜色，根据颜色的有无
和深浅判定结果。
根据操作方式和检测对象的不同，核酸杂交技术主要有以下几种：斑点杂交技术（Dot
blot）、Southern杂交技术（Southern blot）、Northern杂交技术（Northern blot）。前两
者用于检测DNA，后者用于检测RNA。本章主要介绍Southern杂交技术及其与斑点杂交技术
的不同点。而Northern杂交技术将在第17章介绍。
16.1主要内容
1. Southern Blot方法的原理。
2. DNA琼脂糖凝胶电泳。
3. DNA转移至硝酸纤维素膜及膜处理。
4. 介绍随机引物法标记DNA探针，Southern blot的预杂交、杂交及显色过程。
16.2目的要求
掌握Southern blot方法的原理；掌握随机引物法标记DNA探针，印迹法转移DNA至硝
酸纤维素膜及膜处理。
16.3 实验原理
Southern杂交技术是由Edward M. Southern在1975年首先发明的用于检测DNA的一
种核酸杂交技术，并因此而得名。其原理是根据毛细管作用的原理，将在电泳凝胶中分离的DNA
片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过与标记的单链DNA或RNA探针的杂交作用，检测
这些被转移的DNA片段。
主要步骤包括将基因组DNA进行限制性内切酶消化，琼脂糖凝胶电泳分离，经碱变性等预
处理之后，平铺在已用电泳缓冲液饱和了的两张滤纸上，在凝胶上部覆盖一张硝酸纤维素滤膜，
接着加一叠干滤纸，然后再压盖一重物。由于干滤纸的吸引作用，凝胶中的单链DNA便随电泳
缓冲液一起转移。这些DNA分子一旦与硝酸纤维素滤膜接触，便会牢牢地与之结合，而且是严
格按照它们在凝胶中的谱带模式，原样地被吸印到滤膜上。在80℃下烘烤12h，DNA片段就
会被稳定地固定在硝酸纤维素滤膜上。然后将此滤膜移放在加有标记探针的溶液中进行核酸杂
发布者：admin，转转请注明出处：http://www.yc00.com/news/1712826294a2129584.html
评论列表（0条）