海马种类及其鉴定技术分析

海马种类及其鉴定技术分析


2024年3月14日发(作者:)

CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY

海马种类及其鉴定技术分析

陈信忠*1 曾韵颖1

要海马是我国的传统中药,具有良好的药用价值早期药用海马主要来自野生海区捕获,丨「

[

随荇捕捞量的增加,

全球多种野生海马已成为瀕危物种目前,所有野生海马已被世界

0

然保护联盟列人濒危物种红色名录,禁止国际贸易我

国也将海马列为国家二级保护动物近年来我国沿海各地开始人工养殖海马,并取得一定进展,但仍不能满足国内市场的巨

大耑求,因此海马走私入境案件屡有发生由于海马种类多,形态相似,传统形态学鉴定方法已不能满足海关打击走私和归类

化脸所必需的物种鉴定的需求近年来快速发展的

DNA

条形码鉴定技术可以对绝大部分海马和海马制品进行有效的分类和鉴定

关键词

海马;瀕危物种;分类;

DNA

条形码;种类鉴定

Analysis of Species and Identification Techniques of

Seahorses

CHEN Xin-Zhong

1

ZENG Yun-Ying

1

Abstract

Some of the seahorses

Hippocampus

spp. are traditional Chinese medicine in China, having good medicinal value. The

early medicinal seahorses were mainly captured in the wild. However, with the increase of fishing amount, many kinds of wild seahorses

have become endangered species. At present, all wild seahorses had been listed in the Red List of Threatened Species by International

Union for Conservation of Nature, and international trade in seahorses had been prohibited. All of the seahorses were listed as national

second-class protected animals in China. In recent years, some species of seahorses had been artificially cultivated in coastal areas of

China, and made some progress. But it still could not meet the huge demand of the domestic market. Therefore, seahorse smuggling cases

occur frequently. The traditional morphological identification method cannot meet the needs of species identification for Customs combat

against the smuggling and for classification test due to the variety and similarity of seahorses. In recent years, the rapid development of

DNA barcode identification technology can effectively classify and identify the majority of seahorses.

Keywords

seahorses

endangered species

classification

DNA barcoding

species identification.

海马(Hi'ppocampus spp.)是一种小型海洋鱼类,

因其特殊的体型而得名,头呈马头状,头部弯曲与身

体近直角海马在我国有悠久的药用历史,被誉为“南

方人参”,传统中医理论认为海马有补肾壮阳、活血

止痛等功效海马除直接用于治病外,还可用于制造

各种药品和保健品近年来,海马还成为水族爱好者

的观赏品种我国是海马重要的自然栖息地之一,

常见的种类有冠海马(H/ppocampuscorona〖us)、刺

第一作者:陈信忠(1964—),男,汉族,浙江磐安人,研究员,博士,主要从事动物检疫工作.E-mail: 133****************

1.厦门海关技术中心厦门361026

1. Xiamen Customs Technical Center, Xiamen 361026

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海马(

H

.

histn'x

)、日本海马(

H

.

mohnikei

)、管海

马(

H

.

kuda

)、克氏海马

Ui

.

kelloggi

)和三斑海马

(

H

.

trimaculatus

) 自古以來药用海马主要来源于

自然捕捞,但随着捕捞M的不断增加和海域环境的

改变,我国的野生海马资源已H渐枯竭:2004年5

月15 H,我国把海马列为国家二级保护动物按照

《水生野生动物保护实施条例》的规定,捕捞和销

售海马必须获得《中华人民共和国水生野生动物经

营利用许可证》。2019年11月26日,世界自然保

护联盟(International Union for Conservation of Nature,

I

UCN)依据《濒危野生动植物种国际贸易公约》

(Convention on International Trade in Endangered Species

of Wild Fauna and Flora, CITES)更新的世界自然保护

联盟淑危物种红色名录(IUCN Red List of Threatened

Species),将海马属(H/ppocampus spp.)所有物种

全部列人附录n,海马的国际贸易受到了严格的管

制由于国内中药材市场对海马的巨大需求,走私

海马的案例越来越多同时,因海马种类较多,亲

缘关系和品种性状相近,不易Lx:分,导致市场上的

海马品种十分混乱,掺伪掺假现象越来越严重,严

重影响了海马药材的质量和安全因此,了解国内

外海马的种类、分布以及鉴定技术,对打击海马走私,

保护海马资源,促进药用海马的合理应用,具有十

分重要的意义。

1海马的现状

1.1海马的自然分布

在自然界,海马主要生活在热带、亚热带以及温

带的近陆海藻繁茂的浅海海域,大多数种类生长在河

海交汇处,能适应不同盐度的海水,少数种类可以在

淡水中存活:主要分布于太平洋、大西洋以及澳大利

亚海域中国沿海海域均有分布,有近10种海马,

南海海域海马种类较多但由于多年的滥捕.我国海

马自然资源已近枯竭本世纪初,我国干海马年产量

不足30吨,只在汕尾、舟山、福建等沿海地区有少

量生产由于我国海马的生产量远不能满足需求,需

要从国外大量进口。早期海马的自然产区主要在越南、

中国口岸科学技术

菲律宾、泰国和印度尼丙亚我国上世纪80年代进

口量约为每年20多吨,到本世纪初进口量达到150吨

我国于2004年把所有野生海马列为国家二级保

护动物,目前全球大部分国家都已禁止对野生海马的

捕捞。

1.2海马的人工养殖

海马在我国别名龙落子、水马、马头鱼、龙落子

鱼、虾姑等,作为珍贵的中药材,在我国的需求M很

大。由于野生海马资源无法满足消费需求

,一

些国家

和地区开始了海马养殖产业的探索中国是最早开始

海马养殖的国家,也是0前全球最主要的海马养殖国

家由于海马对阳光、温度、饵料的要求很高,早期

人工养殖遇到很多困难1958年,广东汕头海水养

殖场开始少量养殖海马直到1969年,中国科学院

海洋研究所将广东近海的三斑海马引人青岛进行试养

取得成功。1978年,浙江温州等地成功引人广东的

三斑海马进行养殖,并开始小范围推广,但由于各种

病害的影响,海马养殖规模始终难以扩大2000年

以后,随着海马种质资源的改良,海马养殖得以逐渐

发展早期我国主要养殖三斑海马和大海马,还有少

量鲍氏海马和日本海马2009年,我国从美国引进

了繁殖能力和抗病能力强、存活率高、生长速度快的

线纹海马,开始大量养殖,进人产业化阶段线纹海

马又名灰海马,原产于美洲地区,体型较大,最大体

长近20 cm,因其具有较广的温度和盐度适应范围而

更加适宜人工养殖线纹海马只需5个月就能达到性

成熟,养成周期只需6 ~ 8个月经过多年的选育和

推广,线纹海马已占海马养殖总量的近90%目前我

国的海马养殖量约1200万只/年,产量约100吨

海马在我国南方和北方沿海均有养殖,北至河北、南

至广东的整个海岸线上都有养殖海马的企业,福建省

是国内最大的海马养殖基地

虽然我国已有数卜年养殖海马的历史,但由于养

殖技术、成本和品种等方面的原因,长期以来养殖经

济效益不理想,难以形成大规模的产业国外的海马

养殖规模较小,而且价格高,目前主要用于观赏用途

1.3海马走私情况

海马属于中药材,W此海马消费主要集中在华人

49

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区。2012年,中国海马交易量超过1.5亿只,占全球

海马市场交易量的三分之二。近年来,由于海马的国

际贸易受到了严格管控,而国内中药材市场需求量大,

因此走私海马屡有发生。2020年3月,厦门海关在

广州、深圳、拱北海关的大力协助下,同步在福建厦门、

物异名。该濒危名录未列人的物种包括留尼汪海马

(borbon/ens/s )、新喀里多尼亚多棘海马(R

curWcusp/s )和棕海马(H. fuscus )。

2015年版《中华人民共和国药典》收载了 5种

药用海马,分别为线纹海马(H./cd/ogg/)、刺海马

泉州、龙岩,以及广东广州、深圳、珠海、中山等地

对4个走私团伙集中抓捕,一举抓获犯罪嫌疑人26名,

现场查获走私海马干716宁克。该走私团伙在境外大

量收购海马,利用货轮船员、专业“水客”等人员走

私人境,运往国内中药材市场销售牟利。已查明涉案

走私海马2.94吨。2019年4月和5月,青岛海关破

获一起海马走私案,查获两批次从秘鲁走私进口夹藏

在马皮中的海马1.28吨,共计495361尾,案值近6

亿元人民币。2019年9月,昆明海关缉私分局破获

一起走私淑危动物制品案件,查获涉案海马干148.86

千克,案值1.23亿元。2018年12月南宁海关查获走

私海马干22082尾,约37.06千克。

2海马主要种类

海马隶属于硬骨鱼纲(Osteichthyes)、海龙目(

Syngnathiformes)、海龙科(Syngnathidae )、海马属

(f/yppocampus )。目前己知海马属包括54个有效种⑴。

但由于早期的物种命名主要基于形态学特征,存在不

少同物异名的现象。

IUCN濒危物种红色名录收录的濒危物种达

105732个,其中有28338个濒危物种面临灭绝威胁。

全球现有44种海马被列人该名录,这些海马的濒危

状态和自然分布见表1。其中“濒危”(EN) 2种,

“易危”(VU)12种,“近危”(NT)1种,“无危”

(11:)12种,“数据缺乏”(00)17种。在该名录中,

分布于澳大利亚的假眼海马(H. b/oce/〗atus)被认为

是H. Wan/frons的同物异名;白斑海马(Wee/ceri )

是膨腹海马(H. abdom/na〗i_s)的同物异名;东方多

棘海马(H. /iencfn7a_)是窄腹海马(an卵stus )

的同物异名;昆士兰海马(quee/7s〗ancfcus )是

棘海马(H. sp丨nos/ss/mus )的同物异名;多节海马

(H. tubercuMus )是短头海马(;_ceps )的同

50

(

H

.

histrix

)、大侮马(

H

.

kuda

)、三斑侮马(

H

.

tr/macu/atus )和小海马(海蛆)(H. japonicus )的干

燥体M。我国在中医药大健康产业发展背景下,对海

马等传统中药的需求量日益增加。

3海马物种鉴定技术

海马种类多,形态相似。用于中药的海马大多是

干品或干粉。市场上不乏以次充好、以伪充真的现象,

为保证药材安全有效,常常需要对海马进行种类鉴别。

近年来海关系统反走私、打击濒危物种贸易等成为常

态,更需要对查获的各种海马进行准确的鉴定。除传

统的形态学鉴定方法外,近年来发Mf更加准确的分

子生物学检测技术。尤其是DNA条形码技术可以对

各种形态十分相近的种类,以及粉末状的中药粉成分

进行准确的鉴定。

3.1形态学鉴定

形态学鉴定方法主要依据海马的外部形态特征,

包括体长、体高、吻长、头长、吻长与头长的比例、

体色及斑点形态、背鳍和胸鳍的数目、躯干环和尾

环的数0、眼棘、鼻棘和脸棘的数目、头冠和棘的

特点等。不同种类的海马成体的体长差异很大。在

印度尼西亚加里曼丹德拉旺岛发现的豌豆小海马(R

satom/ae),是世界上已知最小的微型海马,体长只

有约1.4 cm,高约1.1 cm。而克氏海马(H )

是世界上已知体型最大的海马,体长可达35 cm。在

我国和印度洋广泛分布,俗称龙落子三斑海马,其主

要特征为体侧背方第1、4、7节分别有一个明显的黑

色斑纹。刺海马的典型特征为体表多刺状棘,体棘和

头棘尖锐,特别发达,头冠不高,具4尖锐小棘,眶

上棘细尖,发达。虎尾海马最典型性状鉴别特征为尾

部有交替出现的花斑,似老虎的尾巴,头冠低小且有

5个显著的圆形突起。

中国口岸科学技术

表1全球海马种类、濒危状态和地理分布

Table 1 Species, endangered status and geographical distribution of globe seahorses Hippocampus spp.

序号

1

2

3

中文名称

南非海马

怀氏海马

斑点海马

鲍氏海马

虎尾海马

直立海马

刺海马

太平洋海马

克氏海马

斑点海马

日本海马

巴塔哥尼亚海马

棘海马

三斑海马

吻海马

膨腹海马

窄腹海马

短头海4

低冠海马

夏威夷海马

贾氏海马

假眼海马

彭氏小海马

花海马

小海马

细尾海4

叶海马鱼

巴氏海

q

驼背海马

短吻海马

克里蒙小海马

高冠海马

软珊瑚海马

丹尼斯小海马

多枝海马

欧洲海马

领海马

梦海马

矛盾海马

侏儒刺海马

豌豆小海马

西澳海马

泰洛海马

条纹海马

拉丁学名

Hippocampus capensis

Hippocampus whitei

Hippocampus algiricus

Hippocampus barbouri

Hippocampus comes

Hippocampus erectus

Hippocampus histrix

Hippocampus ingens

Hippocampus kelloggi

Hippocampus kuda

Hippocampus mohnikei

Hippocampus patagonicus

Hippocampus spinosissimus

Hippocampus trimaculatus

Hippocampus reidi

Hippocampus abdominal is

Hippocampus angustus

Hippocampus breviceps

Hippocampus dahli

Hippocampus fisheri

Hippocampus jayakari

Hippocampus planifrons

Hippocampus pontohi

Hippocampus sindonis

Hippocampus zosterae

Acentronura gracilissima

Phyllopteryx taeniolatus

Hippocampus bargibanti

Hippocampus Camelopardalis

Hippocampus casscsio

Hippocampus colemani

Hippocampus coronatus

Hippocampus debelius

Hippocampus denise

Hippocampus guttulatus

Hippocampus hippocampus

Hippocampus jugumus

Hippocampus minotaur

Hippocampus paradoxus

Hippocampus pusillus

Hippocampus satomiae

Hippocampus subelongatus

Hippocampus tyro

Hippocampus zebra

濒危状态

EN

EN

VU

vu

VU

vu

vu

vu

vu

vu

vu

vu

vu

vu

自然分布

南非

两南太平洋、澳大利亚

西非、大西洋东部

印尼、菲律宾

印度、东南亚

大西洋西部

中国、印度-太平洋

东太平洋

中国,东南亚

印度-太平洋

中国、日本

巴西、阿根廷

中国、印度、澳大利亚

中国、日本、印度、东南亚、澳大利亚等

美国、墨西哥

澳大利亚、新西兰

澳大利亚

澳大利亚

澳大利亚

芙国夏威夷

西印度洋

澳大利亚、印度-太平洋

印度-太平洋中部

中国、日本、朝鲜

美国

日本、越南

澳大利亚

印度太平洋中部

1卜:洲南部和东部

中国、越南

澳大利亚

中国、曰本

埃及

西太平洋

大两洋东北部、地中海

地中海和北大西洋

澳大利亚

澳大利亚、西南太平洋

澳大利亚、印度-太平洋

西太平洋

印尼、西太平洋

澳大利亚

西印度洋

西太平洋

4

5

6

7

8

9

10

11

12

13

14

15

16

17

18

NT

LC

LC

LC

LC

LC

LC

LC

LC

19

20

21

22

23

24

25

LC

LC

LC

LC

26

27

28

29

30

31

32

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

DD

33

34

35

36

37

38

39

40

41

42

43

44

51

CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY

由于虎尾海马大小和外观形态与刺海马相似,体

表也有明显的棘状突起,鼻刺显著,具双颊棘,广泛

分布于菲律宾、印度尼西亚、马来西亚、泰国、新加

坡等东南亚地区的近岸海域虽然虎尾海马产量较高,

但其药效尚不明确,目前虎尾海马也未列人中国药典:

因此,在中药市场上虎尾海马常被作为刺海马的伪品

之一流通使用。

通过形态特征鉴定海马的种类需要观察背鳍和胸

鳍的数目,但由于海马体色不透明,难以准确观察背

鳍和胸鳍梁亮堂(2019 )建立了一套海马透明化骨

骼染色的方法,染色后能够从形态上更加精确观察背

鳍和胸鳍的数目^不仅能应用于海马的种类鉴定,

还可以应用于新型海马标本的制备,但由于海马种类

多,0前很多海马尚缺乏背鳍数和胸鳍数的资料,因

此依据背鳍和胸鳍数对海马种类进行鉴定有很大的局

限性。

对于已经加工成粉末的中药材海马,根据粉末的

形态鉴定种类需要丰富的经验。康延国等(2006 )对中

国药典收载的五种海马的粉末显微特征进行了对比研

究:结果表明,五种海马的皮肤碎片、横纹肌纤维及骨

碎片的特征具有较明显的区别,可用于粉末的鉴别%

形态学鉴定方法简便易行,但需要鉴定者具备一

定的专业知识,并熟悉各种海马的形态特征。由于流

通环节的海马大部分都是干燥体,其外形特征变化较

大,一些近似种外观差异不明显,鉴别难度较大而

且,作为中药的海马药材常被加工成粉末状,难以通

过形态学方法进行品种鉴别传统的中药材鉴定方法

包括性状鉴别、显微鉴定、粉末鉴定和理化鉴别等,

主要依据鉴定者的经验和主观判断由于海马种类多,

可能有多种海马的皮肤碎片、横纹肌纤维、骨碎片和

胶原纤维等显微结构十分相似,大部分海马尚不具备

物种的鉴别特征。因此,需建立更加准确、有效的鉴

定方法。

3.2分子生物学鉴定

3.2.1 PCR 方法

利用PCR、实时荧光PCR等技术,设计特异性

引物和探针,可以对常见的各种海马进行鉴别而多

重PCR方法可以在单次PCR反应中鉴别多种海马。

52

刘富艳等(2018 )基于各种海马线粒体DNA的序列

差异设计了 5对鉴别引物的多重PCR反应体系,可

以同时鉴别管海马、日本海马、克氏海马、刺海马

和三斑海马,其特异性扩增片段大小分别为155、

222、292、352、458 bp,而混伪品无条带%由于

部分海马的亲缘关系很近,其基因序列也很相似因

此,单纯利用PCR技术可能难以区分相似种,需要

对PCR产物进行测序才能确认海马种类

3_2.2 DNA条形码技术

DNA条形码(DNA barcode )是指生物体内能够

代表该物种的、标准的、有足够变异的、易扩增且相

对较短的DNA片段,DNA条形码技术或基因条码技

术,即利用生物体DNA中一段保守片段,通过设计

一对或多对通用引物,用PCR方法进行扩增并测序,

然后与DNA数据库中的基因数据进行比对,从而对

物种进行快速、准确的鉴定:基于DNA进行物种鉴

定的生命条码数据库(Barcode of Life Data Sysrem,

BOLD),是加拿大生物多样性基因组学中心开发的

基于云计算的数据存储和分析平台,可以支持DNA

条码数据的生成和应用它由四个主要模块组成,数

据门户、教育门户、条形码索引编号(推定物种)

注册号以及数据收集和分析平台。C0I基因条码是

BOLD的最主要条码,被广泛应用于分类鉴定、系统

发育关系和种群遗传结构的研究。BOLD系统目前已

收录的海马属样品记录为2144条,具有序列的样品

2105条,具有基因条码的样品2101条,涉及96个

物种其中具有基因条码的物种为86种,公共记录

1411条,公共物种(Public Species) 88种,具有公

共条形码索引编号(Barcode Index Numbers, BIN )

的38种,涵盖常见的主要海马种类。目前CITS列入

的44种海马中尚有13种海马没有相应的基因条码

数据,包括克里蒙小海马(H. co/eman/)、低冠海马

(c/aM )、软珊瑚海马(H. debe//us )、领海马(

iugumus )、梦海马(H. m丨'notaur )、矛盾海马(H.

paradoxus ),假眼海马(f/. piam'fro/is )、侏儒刺海马

(

H

_

pusillus

)、婉豆小海马(

H

.

satomiae

)、花海马

(

H

_

sindonis

)、泰洛海马(

H

.

tyro

)、条纹海马(

H

.

zebra)和细尾海马(Acentromjragrac;7/ss/ma)。

应用DNA条形码技术可以对绝大部分海马物种

进行有效的鉴定C01基因是目前最常用的物种鉴定

DNA条码,利用C0丨基W可以鉴別绝大部分海马种类

Peter等(2004)基于海马部分核基因和线粒体基因

序列对32种海马进彳丨广分类研究1(ii Sanders等(2008 )

利用海马细胞色素b基W,对美国市场上的海马进行

了分子鉴定|71.:, Lopez等(2010 )利用海马16S rDNA

序列和基因组微卫星序列对西班牙海域的长吻海马和

短吻海马进行了种类鉴定分析M。胡嵘等(2012)研

究了 14种海马、海龙及其混伪品的COI条形码序列,

表明海马、海龙种内C0I序列变异很小且稳定,而种

间变异较大,种间的遗传距离显著大于种内的遗传

距离,可以明确区分这些海马、海龙及其混伪品,

与形态学分类的结论相一致間。董世雄等(2017 )利

用C01条形码,对来IV海南和福建的海马样品进行了

准确的鉴定,分別为管海马(H. /cuda )和三斑海马

来梦茹等(2019 )对中药市场上常见的海马伪品

虎尾海马进行了研究,其C0I序列种内存在一定的变

异率,但种内变异远小于与另外8种海马药材的种间

遗传距离,因此可准确K分市场中的虎尾海马蒋

超等(2018 )报告了安国、亳州等全国8个主要药材

市场的海马C01基W条码检测结果,发现市售海马样

品共有23个物种,包括所有2015年版《中国药典》

收载的5种海马,以及18种《中国药典》以外的海马,

其中地图海马、驼背海马、南非海马、北部湾海马、

欧洲海马、半棘海马、条纹海马等均为首次发现于我

国中药材市场〜。孙思雅等(2019)构建了基于海马

C0I和ATP6基因的邻接系统发育树,棘海马样品单独

聚为一个大分支,明显区分于其他海马样品,且与线

纹海马亲缘最近而且,棘海马种内存在3个稳定的

亚群结构,提示CO丨和ATP6序列可用于棘海马的地

理生态学研究™陈梦等(2019 )建立了三斑海马的

C01、16SrRNA和ATP6的条形码序列数据库,平均

种内K2P遗传距离分别为0.002、0.001和0.006,远小

于三斑海马的种间K2P距离;系统进化分析结果显示,

三斑海马与其他海马均可有效区分,具有良好的单系

性。表明COI、16SrRNA、ATP6序列作为条形码均可

以鉴定三斑海马及其他混伪品海马药材

中国口岸科学技术

海马属部分物种亲缘关系较近,少数物种利用单

一 DNA条形码无法进行准确区分蒋超等(2018 )

研究表明,C0I序列进行邻接树聚类分析时,管海马、

太平洋海马、西非海马、吻海马、短吻海马和南非海

马等共同聚为一大支,形成管海马复合体,其中一些

种类无法相互区分。在这种情况下,需要选择2个或

2个以上的基因条码进行鉴别_

对极少数亲缘关系十分接近的海马物种,还可以

通过线粒体全序列测定方法进行比较和鉴定与单个

线粒体条形码基因相比,线粒体全序列包含的遗传信

息更丰富、变异位点和序列更多样,因此鉴定结果也

更加准确。Chang等(2013)已经完成了虎尾海马、

线纹海马、棘海马、南非海马、欧洲海马和驼背海马

等多种海马的线粒体全序列测定工作,为规范海马中

药材市场的技术开发奠定基础,也为我国海马资源的

遗传多样性保护、海马良种选育提供了支撑但

全序列测定方法耗时耗力,不能满足普通实验室对海

马物种进行快速、简便的检测鉴定需求:

4结语

海马种类多、分布广,不同国家和地区分布的海

马种类有很大不同。但由于其形态相似,尤其是药用

干制品形态变异较多,难以依据形态特征进行准确、

有效的鉴定近年来发展起来的基因条码鉴定技术为

海马物种的鉴定提供了有效的手段,目前已知的绝大

部分海马均可通过单个基因条码或多个基因条码组合

进行有效区分。

海马是我国重要的中药材,由于野生自然资源日

渐匮乏,已被列入CITES名录,禁止国际贸易但由

于国内需求量大,人工养殖种类和数量远远不能满足

需求为牟取暴利,走私海马的案例不断出现,规模

越来越大:因此,海关要加大稽查力度,并准确鉴定

海马种类,杜绝海马等濒危野生动物的走私,切实保

护各种珍稀海马。

【该文经CNKI学术不端文献检测系统检测,总

文字复制比为7_3%。】

53

CHINA PORT SCIENCE AND TECHNOLOGY

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(文章类别:CPST-A)

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