2024年1月21日发(作者：)

Journal of China Prescription Drug Vol.19 No.1·实验研究·37国产、进口及国外三种吗替麦考酚酯胶囊的体外溶出曲线对比研究张晓燕1，徐慧娟1，李宏杰2（1瀚晖制药有限公司，杭州 310020；2浙江海正药业股份有限公司，浙江台州 318000）【摘要】目的 通过建立有区分力的溶出曲线测定方法，对国产、进口原研及美国橙皮书收载的参比制剂三种吗替麦考酚酯胶囊进行体外溶出曲线的对比研究，以评价国产制剂、进口及国外原研参比制剂溶出行为的一致性。方法 参考美国FDA溶出曲线数据库、日本IF文件及中国药典公布的吗替麦考酚酯胶囊溶出检测条件，选择0.1 N HCl、水、pH6.8磷酸盐缓冲液和pH5.0柠檬酸缓冲液4种不同pH值的溶出介质，对国内外上市的法对溶出曲线进行评价。结果 三种制剂在0.1 N HCl介质中15 min累计溶出量三种吗替麦考酚酯胶囊溶出曲线进行对比研究，通过相似因子（f2）均大于85%；国产制剂与国内外参比制剂在水、pH6.8磷酸盐缓冲液和pH5.0柠檬酸缓冲液三种溶出介质中的溶出曲线相似因子f2均大于50。结论 国产制剂、进口及国外三种制剂在4种不同溶出介质中的溶出曲线均一致。【关键词】吗替麦考酚酯胶囊；溶出；溶出曲线；f2相似因子

XU Hui-Comparative studies on dissolution profiles of three Mycophenolate Mofetil Capsules in different dissolution mediums

ZHANG Xiao-yan*，juan， LI Hong-jie. *Hanhui Pharmaceutical Co.， Ltd， Hangzhou

310020， China. including domestic generic preparation、【Abstract】Objective To compare the dissolution profiles of three Mycophenolate Mofetil Capsules，imported brand name preparation and RLD listed in the Orange book， in 4 different mediums and evaluate the quality difference between them.

Methods

Refer to dissolution methods under Mycophenolate Mofetil Capsules monographs published on FDA "dissolution database "、"Japanese IF" and Chinese

"Pharmacopoeia" 2015 edition，four different pH mediums，including 0.1N HCl，water， pH6.8 phosphate buffer and pH5.0 acetate buffer， were selected to

compare the dissolution profiles of three preparations . The dissolution profiles were evaluated by f2 similarity factor.

Results Three preparations were rapidly

dissolved in 0.1N HCl medium. Similarity factors f2 in water， pH6.8 and pH5.0 are all greater than 50.

Conclusion The dissolution profiles of the three

preparations in four different pH dissolution mediums are similar. Mycophenolate Mofetil Capsules； Dissolution； Dissolution Curve； f2 similarity factor【Key words】吗替麦考酚酯是霉酚酸的2-乙基酯类衍（MMF）（MPA）生物，在体内经水解形成MPA。MPA可抑制鸟嘌呤核苷酸的起始合成路径，使鸟嘌呤核苷酸耗竭，进而阻断DNA的合成，其对淋巴细胞具有高度选择作用，特异性作用于T、B淋巴细胞，抑[1]制其增殖，属于第3代新型的免疫抑制剂。本品1995年5月首次在美国上市1997年由Roche（罗氏）（商品名“Cellcept”），申请在中国上市，商品名为“骁悉”。本试验对国产制剂与原研进口分包装制剂以及美国（骁悉）橙皮书收载的参比制剂在不同pH介质中的溶出曲线进（Cellcept）行了对比研究，以评价其溶出行为相似性和质量一致性。根据生属于难溶性物药剂学分类系统MMF被归类为BCS Ⅱ类[2]，（BCS），药物，药物的溶出和溶解直接影响药物的吸收。溶出量过低的药物，容易出现12粒溶出的RSD过大而无法参考《普通口服固体制[3]法进行评剂溶出曲线测定与比较指导原则》采用相似因子（f2）价。本实验的溶出方法重点关注提高药物溶出量以及f2适用性，开发的方法具有区分力，为仿制药一致性评价提供试验依据。1 仪器与试药1.1仪器Agilent 708-DS药物溶出度测定仪；Agilent-1200型高效液相色谱仪Agilent-1260型高效液相色谱仪（HPLC）；（HPLC）；梅特勒 XP205电子天平；紫外分光光度计、真空脱气机（天津天大天发科技有限公司）1.2试药与试剂吗替麦考酚酯胶囊规格0.25

（浙江海正药业股份有限公司，g/粒，批号21710281B、21711091B、21710191B、11022302）；吗规格：0.25 g，替麦考酚酯胶囊骁悉®，（上海罗氏制药有限公司，批号SH2141、SH1280）吗替麦考酚酯胶囊；（美国橙皮书收载的规格：250 mg，批号M1647）参比制剂，Roche，Cellcept®，。吗替表1：吗替麦考酚酯在不同pH值介质中的溶解度介质介质pH值溶解度（mg/ml）0.1N盐酸1.0247.294 1pH4.5缓冲液4.500.761 7麦考酚酯对照品1701-1，纯度99.6%）乙腈（企业自制，；（色谱纯，新蓝景，批号B1608036153，纯度≥99.9%）其他试剂均为，分析纯。纯化水自制。2方法2.1分析方法参考美国FDA溶出曲线数据库、日本PMDA网站公布的原研产品IF文件及中国药典公布的吗替麦考酚酯胶囊溶出检测条件，选择0.1N HCl、水、pH6.8磷酸盐缓冲液和pH5.0柠檬酸缓冲液4种不同pH值的溶出介质，对国内外上市的三种吗替法对麦考酚酯胶囊溶出曲线进行对比研究，通过相似因子（f2）溶出曲线进行评价。pH溶解度曲线绘制：根据《人体生物等效性试验豁免指导原则》对吗替麦考酚酯在pH 1.0～6.8的介质中溶解度进行测定，结果见表1，曲线见图1。结果表明，本品溶解度呈现呈pH依赖性，中性条件下的溶解度非常低，pH 7.4时仅约40

μg/ml。因此，溶出方法开发的重点在于提高溶出量。图1：吗替麦考酚酯不同pH-溶解度曲线2.2溶出介质参考《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则》，推荐选择不少于3种pH值的溶出介质进行溶出曲线考察，对pH5.0缓冲液5.00.316 3pH5.6缓冲液5.600.154 8水6.410.146 9pH6.8缓冲液6.800.068 0

38中国处方药 第19卷 第1期·实验研究·表2：在0.1 N HCl介质中的溶出数据批号M1605（RLD-美国）溶出度（%）5 min10 min15 min20 min30 min546%843.5%857.3%884.3%863.4%884.0%876.2%933.7%931.4%924.4%962.3%932.2%931.4%933.0%962.8%970.7%963.3%991.4%961.7%961.4%981.9%983.3%980.8%982.6%1011.5%981.1%981.3%991.6%991.9%于溶解度受pH值影响大的药物，可能需在更多种pH值的溶出介质中进行考察。经查FDA溶出度数据库及中国药典2015年版收载的吗替麦考酚酯胶囊专论，其溶出介质均采用0.1 N 盐酸溶液；此外，日本PMDA网站公布的原研产品IF文件公布的溶出介质包括了0.1 N 盐酸溶液、pH5.0缓冲液，pH6.8缓冲液和水。结合溶解度测定结果及指导原则建议，选择如下4种介质进行溶出曲线对比研究：①0.1 N 盐酸溶液，②pH5.0柠檬酸缓冲液0.9 g氢氧化钠溶于1 000 ml脱气水（称取6.8 g磷酸二氢钾、中，用氢氧化钠溶液调pH至6.8±0.05，混匀即得pH6.8溶液）；③pH6.8磷酸盐缓冲液7.16 g十二水（称取3.15 g一水柠檬酸，合磷酸氢二钠溶于1 000 ml脱气水中，用磷酸或氢氧化钠溶液调pH 5.0±0.05，混匀即得pH5.0溶液）④水。；2.3溶出条件0.1N HCl溶液：本品在酸性介质中溶解度尚可，因此，在该介质中的检测条件，直接参考FDA溶出度数据库，即：桨法＋沉降篮，溶出介质体积为900 ml，转速为40 r/min，取样时间5、10、15、20、30 min。pH5.0柠檬酸缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液和水：随着pH升高，本品溶解度明显下降，过低的溶出量导致12粒溶出的相过大，不适用于相似因子法比较，因此，对标准偏差（f2）（RSD）方法开发的重点在于提高药物溶出量。首先尝试在3种介质中添加一定浓度的表面活性剂，但结果表明，在pH4.5～pH6.8介质中添加0.1%～1.0%的SDS 或吐温80后，溶出量均未达到漏槽条件，改善效果不明显。故认表3：在水介质中的溶出数据批号M1647（RLD-美国）SH2141（RLD-进口分包装）SH2180（RLD-进口分包装）21710281B（国产）21711091B（国产）21710191B（国产）11022302（国产）溶出度（%）5 min4

21.3%7

19.0%8

11.3%5

23.3%6

16.3%341.7%231.9%10 min14

7.3%16

3.9%16

5.3%13

6.4%15

4.6%1116.9%911.6%15 min18

3.8%20

1.8%20

1.3%17

2.9%19

2.3%167.8%146.7%RSD溶出度（%）60SH2141（RLD-进口分包装）RSD9.5%溶出度（%）67SH2180（RLD-进口分包装）RSD7.4%21710281B（国产）21711091B（国产）21710191B（国产）11022302（国产）溶出度（%）5411.5%5710.3%578.8%4712.8%RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD为在基础缓冲液中添加表面活性剂的方式较为困难。另行尝试提高转速至100 r/min后，溶出量有显著改善，法比较溶RSD大大降低，满足指导原则关于采用相似因子（f2）出曲线相似性的要求，故确定其他3种介质溶出条件如下：桨法溶出介质体积为900 ml，转速为100 r/min，取样时间＋沉降篮，5、10、15、20、30、45、60、90和120 min。2.4 检测方法及溶液配制0.1 N HCl溶液：参考USP标准，选择紫外分光光度法测定，检测波长250 nm。pH5.0柠檬酸缓冲液、pH6.8磷酸盐缓冲液和水：为提高检20 min20

3.2%21

1.2%21

0.7%19

2.0%21

1.6%185.1%165.2%30 min21

3.0%23

0.6%22

0.7%21

1.3%23

1.2%212.9%194.9%45 min23

3.1%23

0.5%23

0.6%22

1.0%24

0.8%222.0%204.3%60 min23

2.8%24

0.6%24

0.8%23

0.8%24

0.9%231.8%214.5%90 min23

2.9%24

0.4%24

0.6%23

0.7%25

0.6%241.4%224.2%120 min24

2.9%24

0.6%24

0.7%24

0.6%25

0.6%241.2%224.0%RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD表4：在pH6.8缓冲液介质中的溶出数据批号M1647（RLD-美国）SH2141（RLD-进口分包装）SH2180（RLD-进口分包装）21710281B（国产）21711091B（国产）21710191B（国产）11022302（国产）溶出度（%）5 min618.3%87.3%816.3%425.8%625.9%525.0%221.0%10 min163.0%162.7%162.6%125.9%146.2%136.6%87.8%15 min191.5%181.7%180.9%162.6%173.9%163.3%123.7%20 min201.3%191.6%190.9%171.8%183.3%172.5%142.6%30 min211.0%201.9%200.8%191.4%192.9%191.9%161.6%45 min210.7%201.7%210.6%191.3%202.7%191.7%171.5%60 min220.7%211.9%210.5%201.2%202.9%201.7%181.5%90 min220.5%212.0%210.7%201.2%212.0%201.4%191.4%120 min220.5%211.9%210.9%201.5%211.8%201.8%191.4%RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD

Journal of China Prescription Drug Vol.19 No.1表5：在pH5.0缓冲液介质中的溶出数据批号M1647（RLD-美国）SH2141（RLD-进口分包装）SH2180（RLD-进口分包装）21710281B（国产）21711091B（国产）21710191B（国产）11022302（国产）溶出度（%）5 min1123.9%1915.5%1819.5%831.3%1325.6%918.1%753.2%10 min369.0%429.3%415.1%308.7%3510.8%345.2%309.7%15 min496.7%537.5%523.6%426.4%465.2%452.6%434.4%20 min555.3%586.3%592.5%484.1%523.3%512.2%502.6%30 min624.3%644.5%652.0%551.8%592.1%572.6%581.5%45 min664.0%692.6%691.9%601.4%641.5%612.6%631.6%60 min683.9%711.8%711.9%621.3%661.3%632.5%661.5%·实验研究·3990 min713.8%730.9%732.0%641.2%691.3%662.7%691.6%120 min723.8%740.8%741.9%661.3%701.3%672.7%711.5%RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD溶出度（%）RSD测灵敏度，采用HPLC方法检测溶出量，方法经验证确认可行。色谱条件：Phenomenex Ib-sil C8色谱柱5

μm（250 mm×4.6 mm，或等效）乙腈与溶液A（2 ml三乙胺和650 ml水混合，用磷酸；调节pH＝5.3）按30∶20体积比例混匀为流动相；0.1 N盐酸或乙腈-水为稀释剂，柱温45℃；检测波长250 nm；进样（4∶1）量10

μl；流速1.5 ml/min。对照品溶液的配制：精密称取约27 mg吗替麦考酚酯对照品于100 ml容量瓶中，加稀释剂超声溶解并稀释至刻度，混匀即得。样品溶液的配制：将吗替麦考酚酯胶囊投入溶出杯中，开始转动并立刻计时。按方法规定的取样时间取样5～10 ml。通过10

μm超高分子聚乙烯全流通过滤器在线过滤后，再用0.45

弃去3 ml初滤液，收集续滤液。μm再生纤维素滤膜过滤，3 结果国产制剂21710281B、21711091B、21710191B和11022302）（批号：与美国橙皮书收载的参比制剂M1605M1647）以及国内上市（批号：参比制剂SH2141、SH1280）的多介质溶出曲线对比结果见表（批号：2～5、图2～5。相似性比较：参考《普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较法，比较溶出曲指导原则》采用非模型依赖法中的相似因子，（f2）线相似性。对比国产仿制制剂、国内和国外原研参比制剂在各结果显示，在0.1 N HCl溶液介质取样点的平均溶出量，（n＝12）中，三种制剂15 min时的平均溶出度均在85%以上，判定三种制剂溶出曲线均相似；在水、pH6.8缓冲液和pH5.0缓冲液介质中，数值均大于50，判定国产制剂与国任两条溶出曲线相似因子（f2）内外原研参比制剂在三种介质条件下的溶出行为均相似。结果说明海正药业生产的国产吗替麦考酚酯胶囊与美国橙批号21710281B图2：在0.1NHCl溶液中的溶出曲线注：自研制剂四批与原研制剂三批在15 min时的溶出度均达到85%以上，无需对比f221711091B21710191B11022302f2M164777.8

85.3

79.1

63.4

SH214183.4

92.5

85.6

66.5

SH218082.5

91.8

84.6

66.1

图4：在pH6.8缓冲液中的溶出曲线及f2数值批号21710281B21711091B21710191B11022302f2M164795.689.086.874.1SH214183.494.777.467.5SH218084.393.977.968.0批号21710281B21711091B21710191B11022302f2M164759.0

79.7

66.9

69.0

SH214150.5

62.7

56.0

56.5

SH218050.6

62.8

56.0

56.8

图3：在水中的溶出曲线及f2数值图5：在pH5.0缓冲液中的溶出曲线及f2数值

40中国处方药 第19卷 第1期·实验研究·HPLC同时测定糖足泡剂中盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱的含量徐艳（南京中医药大学连云港附属医院药学部，江苏连云港 222000）5

μm）流【摘要】目的 建立同时测定糖足泡剂中盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱含量的HPLC方法。方法 色谱柱为Gemini C18（4.6×250 mm，；动相：乙腈- 0.03 mol/L磷酸二氢钾梯度洗脱；流速：0.8 ml/min；检测波长：282 nm；柱温：30℃。结果 盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱分别在（A）（B）3.51～70.20

μg/ml 范围内线性关系良好，平均回收率97.9%，0.77～15.40

μg/ml（r＝0.999 9，n＝6）n＝6）RSD分别为1.8%，（r＝0.999 9，和1.3%。结论 建立的方法简便、准确可靠，可用于测定糖足泡剂的质量控制。【关键词】糖足泡剂；盐酸黄柏碱；盐酸小檗碱HPLC simultaneous determination of Phellodendrine Hydrochloride and Berberine Hydrochloride in Tangzu Bag Bubble

XU ment of

Pharmacy， Lianyungang affiliated Hospital， Nanjing University of traditional Chinese Medicine，Lianyungang

222002，China.【Abstract】Objective A HPLC method was established to determine the content of Phellodendrine Hydrochloride and Berberine Hydrochloride in

Tangzu Bag s The chromatographic column was Gemini C18（ 4.6×250 mm，5

μm） mobile phase： acetonitrile -0.03 mol/L potassium

；（A）dihydrogen phosphate gradient elution； flow rate：0.8 ml/min； detection wavelength：282 nm；column temperature：30℃.Results Phellodendrine

（B）9， respectively the linear relationship was good in the range of 3.51～70.20

Hydrochloride and Berberine Hydrochloride 0.77～15.40

μg/ml（r＝0.999，9，

n＝6） with an average recovery rate of 97.9%，

RSD was 1.8% and 1.3%， respectively.

Conclusion The established method is

μg/ml（r＝0.999，，simple， accurate and reliable， and could be used to determine the quality control of Tangzu Bag Bubble.

Tangzu Bag Bubble；Phellodendrine Hydrochloride；Berberine Hydrochloride【Key words】生水蛭、地龙、当归、狗糖足泡剂处方由三七、黄柏、萆薢、脊、苍术、川牛膝、皂角刺、苦参、金银花、丝瓜络组成，具有清热解毒、祛湿消肿、活血化瘀、通络止痛之功效，用于干性、混合性糖尿病足坏疽，有自动清创、去腐生新、促使创面愈合的作用。该处方中主药黄柏主要含小檗碱、黄柏碱、木兰花碱、药根碱等生物碱类成分，具有抗细菌、真菌、病毒等病原微生物的作用[1-3]，与本品制剂药效密切相关，为了有效控制本品质量，笔者参考相[4-5]关文献对本品中盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱两个成分的测定方法进行了考察，最终采用HPLC建立同时测定该制剂中盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱含量的方法，可用于本品的质量控制。1 仪器和试药Waters2695高效液相色谱仪，2487紫外检测器，美国Agilent公司；BP-211D电子天平，德国Sartorius公司；Centrifuge 5415D 高速离心机； 糖足泡剂160401、160501、160601）盐酸黄柏（批号：；碱对照品111895-201202，含量以93.9%计）盐酸小檗（批号：、碱对照品110713-201212，含量以86.7%计）均购自中（批号：，国食品药品检定研究院。乙腈美国天地公司）水为娃（色谱纯，，哈哈纯净水，其它试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件色谱柱为Gemini C18色谱柱 5

μm）流（4.6 mm×250 mm，；动相：乙腈- 0.03 mol/L磷酸二氢钾梯度程序为：0～20

（A）（B），min，10%～20%A；20～45 min，20%～30%A，45～50 min，30%～35%A；流速：0.8 ml/min；检测波长：282 nm；柱温：30℃；色谱图见图1。2.2 对照品溶液制备取盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱分别为3.0、15.0

μg的混合对照品溶液。2.3 供试品溶液制备精密量取本品10 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇10 ml，置60℃水浴中保温10 min，取出，超声频率40 kHz）（功率500 W，30 min，冷却，加甲醇稀释定容置刻度，摇匀，滤过，去续滤液，作为供试品溶液，同法制得黄柏阴性供试品溶液。2.4 线性关系考察称取盐酸黄柏碱和盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，制得每1 ml含盐酸黄柏碱38.5

μg、175.5

μg盐酸小檗碱的混合溶液，倍数稀释，得系列对照品溶液，注入液相色谱仪，测定，峰面积为纵坐标绘制标准曲以进样浓度为横坐标，（Y），（X）和

Y＝线，回归方程分别为Y＝8 272.8X＋481，r＝0.999 9；盐酸小檗碱分别2 673.6X＋187.04，r＝0.999 9。盐酸黄柏碱、在0.77～15.40

μg/ml和3.51～70.20

μg/ml范围内呈良好的皮书收载的原研参比制剂及中国上市的原研参比制剂在4种不同溶出介质中的溶出曲线均相似，说明国产制剂处方及工艺可行，体外溶出行为与国内外原研参比制剂一致。4 讨论本品属于低溶解性药物，溶出是体内吸收和利用的限制因素，本实验重点关注提高药物溶出量，解决因溶出量过低造法进行评价的情况。通成RSD过大而无法采用相似因子（f2）过溶出曲线对比研究，可以直观反映不同制剂的体外释放速度和程度相似性，有利于对产品质量一致性进行更全面的评估。本研究开发的溶出方法，三种制剂在各介质中12粒溶出10 min的溶出度RSD均不大于20%，度的RSD，10 min之后的所有溶出度的RSD均不大于10%，适用于采用f2因子进行评价，溶出均一性良好，经方法学验证可用于本品溶出曲线的分析和评价。实验结果表明，三种制剂在4种介质中溶出行为均一致，表明三种制剂体外溶出行为一致，为仿制药一致性评价提供了试验依据。参考文献[1] 袁恒杰.吗替麦考酚酯临床应用新进展[J].天津药学，2012，2462-65.（4）：[2] Benet LZ， Broccatelli F， Oprea TI. BDDCS applied to over 900

drugs[J]. AAPS J， 2011，13（4）519-547.

：[3] 国家药品监督管理局.普通口服固体制剂溶出曲线测定与比较指导原则[Z]. 2016-03-18.