2023年12月10日发(作者：)

词斟工业》・２０１０年舞墨！笪篡！墨塑　囝画鳗画域画　画画国　陶青燕张勇李鑫罗国强　圃　摘要：试验研究比较变色江团和正常江团在黑色素代谢相关生化指标上的差异，以探讨引起养　殖江团体色改变的可能因素。研究结果表明，变色江团体内铜水平正常，从其体内较高水平的丙二醛　（ＭＤＡ）含量以及代偿性升高的还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）水平表明变色江团体内存在较为严重的氧化损　伤，而皮肤中酪氨酸酶活性的降低是导致皮肤黑色素合成不足的直接原因。　关键词：江团（Ｌｅｉｏｃａｓｓｉｓ　ｌｏｎｇｉｒｏｓｔｒｉｓ）；黑色素；体色改变　中图分类号：￥９６５　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１—９９１Ｘ（２０１０）１８—００１８—０２　从２００２年起，各类元鳞鱼体色改变的现象在水　（３　０００　ｒ／ｍｉｎ，１０　ｍｉｎ）取血清，一２Ｏ℃下保存待用。取　产养殖行业呈不断高发的趋势，一方面由于其发病迅　各试鱼肝胰脏，冰浴匀浆后放人液氮中保存待用。用　速，明显而迅速成为人们关注的热点；另一方面，由于　手术刀取鱼体背鳍后侧背中线附近２ｘ２　ｃｍ　的皮肤　其发病规律性较差，难于复制等特征，目前还未确定　及鱼体右侧腹鳍后侧２ｘ２　ｃｍ　侧的皮肤。鱼皮剥离肌　出其致病因子的分类。变色鱼的主要特征为黑色素的　肉后，按照１：ｌｏ（ｗ／ｖ）溶于ｐＨ值７．４冷的０．１　Ｍ的　丢失，并因鱼的品种不同而表现出各种奇异的体色。　ＰＢＳ缓冲液中冰浴匀浆，４℃培养３～１２　ｈ，在４　ｑＣ下，　由于变色鱼从视觉上难以被消费者接受，从而给水产　养殖，特别是特种水产养殖带来巨大的经济损失。目　的研究仅见于变色鱼鳞片黑色素细胞的显微观察分　１２　０００　ｄｍｉｎ，离心３０　ｍｉｎ，取得上清液，得到皮肤抽提　液，冻存于一７０℃备用。　肝脏中总蛋白含量的测定采用考马斯亮兰法试剂　前关于养殖鱼体体色改变的原因还不甚清楚，其系统　１－３指标测定　析，而对于生产中变色频率最高的无磷鱼体色改变的　盒（天根生化科技公司生产）；肝脏中还原型谷胱甘肽　生化研究还尚未见开展。江团学名长吻鲍，是我国特　（ＧＳＨ）的测定参见还原型谷胱甘肽试剂盒操作方法　有的优良无鳞鱼品种，具有肉质鲜美，经济价值高的　（南京建成生物工程研究所生产）；血清丙二醛（ＭＤＡ）　特性。本研究拟采集变色江团和正常体色江团就可能　的测定参见ＭＤＡ试剂盒操作方法（南京建成生物工程　影响黑色素形成的相关因子进行比较研究，以探讨引　研究所生产）；血清铜蓝蛋白的测定参见铜蓝蛋白试剂　起无鳞鱼体色改变的内在生化机制。　１材料与方法　盒操作方法（南京建成生物工程研究所生产）。　酪氨酸酶活性分析参照Ｚｈａｎｇ等（２ｏｏｏ）ｆ　１的方法　进行。酶的活力单位（ｕｎｉｔ）规定为，在试验条件下，每　１．１试验动物　在成都周边渔场购买体重为２５０　ｇ左右的健康　分钟每毫克蛋白ＯＤ值增加０．００１规定为一个酶活力　江团以及正处于体色异常阶段的变色江团各５尾。其　单位。抽提液中蛋白浓度的测定同肝蛋白。　中变色江团体表黑色素部分脱落，呈斑块状，正常江　１．４数据分析　团体表色素分布均匀，自然，呈灰白色。　１．２样品采集　试验数据采用ＳＰＳＳ软件进行统计分析，结果用　平均数±标准差表示，并用Ｔ—Ｔｅｓｔ进行显著性检验。　分别于尾静脉处取各试鱼的血液３　ｍｌ，４℃离心　２结果与分析（见表１、表２、表３）　表１　正常及变色江团肝脏蛋白、肝脏ＧＳＨ的含量　陶青燕，通威动物营养科技公司，博士，６１０２１１，四川双　流西航港经济开发区腾飞路７３９号。　张勇，云南大学亚洲国际交流中心　注：　表示差异显著（Ｐ≤０．０５），　表示差异极显著（Ｐ≤０．Ｏ１），未　标注者表示差异不显著（Ｐ＞Ｏ．０５）。下表同。　李鑫，单位及通讯地址同第一作者。　罗国强，通威水产科技公司。　收稿日期：２０１０—０５—２３　从表１可以看到，正常组肝蛋白的含量显著高于　堕壹墓等：养殖江团体色改变的生化分析　变色组（Ｐ＜０．０５），而正常组肝中ＧＳＨ含量显著低于变　色组（Ｐ＜０．０５）。　表２正常及变色江团血清铜蓝蛋白及ＭＤＡ含量　水声　色鱼相对于正常鱼其皮肤中色素合成的关键酶活性　显著下降，这与叶元土等（２００６）［４］观察到变色鱼鳞片　中出现大量黑色素细胞凋亡的现象相吻合。　目前尚有不少水产工作者认为，变色鱼仅在皮肤　有病理变化而对鱼体没有损伤，从本试验结果可以看　出，变色鱼肝脏蛋白的含量显著的低于正常组，表明　肝脏存在严重的损伤。同时在临床上可以看到部分变　从表２可以看出，正常组血清中铜蓝蛋白的含量　色鱼的肝脏呈豆腐渣样，并且鱼体体表有比较严重的　与变色组之间不存在显著的差异，但变色组血清中　血现象，若未及时治疗，病程较长的池塘也会出现　ＭＤＡ的含量极显著的高于对照组（Ｐ＜０．０１）。　大规模的死亡。　表３正常及变色江团皮肤酪氨酸酶活性　在近年来的分析讨论中，不少研究者将牙鲆等海　旦　堂塑　垄鱼　水鱼的白化与无鳞鱼的体色改变在一定程度上划了　背鳍后沿酪氨酸酶含量［Ｕ／（ｍｉｎ・ｒａｇ）］Ｏ．０３０－＋０．０２７　０．Ｏ１１－０．００５　等号。但在我们的研究及实践中发现，这两者之问是　腹鳍后沿酪氨酸酶含量［ｕ／（ｍｉｎ－ｍｇ）］０．０２４＋０．０１０　０．００８＿＋０．００２　存在较大差异的。虽然同为皮肤色素异常，但鲆类的　白化往往发生在幼鱼阶段，其发病过程可能涉及细胞　从表３中可以看出，正常及变色江团皮肤中酪氨　的分化，并且这种病理改变往往是不可逆的，相对于正　酸酶的活性存在显著差异，同一部位正常组明显高于　常皮肤，白化的皮肤往往具有更高的酪氨酸酶活性Ｉ５】。　变色组，其背鳍后沿和腹鳍后沿皮肤处的酶活力均为　而近年来多发的无鳞鱼变色可发生于养殖鱼类的各　变色组的３倍。　个阶段，并且在生产实践中表现出明显的可逆性，其　３讨论　黑色素的减少与皮肤中酪氨酸酶活性降低直接相关。　我们在生产实践中发现铜离子在治疗无鳞鱼的　因此，用鲆类白化的研究成果来分析无鳞鱼的变色可　变色方面表现出不稳定的疗效，而铜是酪氨酸酶的辅　能是欠妥的。　基，对于黑色素的形成具有重要作用，因此，无鳞鱼体　４结论　色的改变是否是由铜缺乏引起的，目前还未见报道。　本研究结果表明，变色江团相对于正常江团体内　但本试验结果表明，正常江团与变色江团的血清铜蓝　铜水平正常，变色江团存在严重的氧化损伤，具体表　蛋白的含量之间不存在显著差异，并且铜离子广泛存　现为血浆ＭＤＡ水平的上升和ＧＳＨ的代偿性升高，而　在于养殖水体中。在常规养殖条件下，未见鱼体铜缺　变色江团皮肤酪氨酸酶活性的显著下降并导致黑色　乏症的发生。这就基本排除了鱼体因铜缺乏导致黑色　素合成抑制是导致变色江团皮肤黑色素丢失的直接　素合成障碍的可能性。　生化原因。　已知ＭＤＡ是脂质过氧化的最终分解产物之一，　参考文献　其含量能直接反映机体脂质过氧化程度，并间接反映　细胞损伤程度。而ＧＳＨ作为机体重要的抗氧化防御物　［１】Ｚｈａｎｇ　Ｓ　Ｃ，Ｌｉ　Ｇ　ＩＬ．Ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ｐｈｅｎｏｌｏｘｉｄａｓｅ　ａｎｄ　ｐｒ０ｐｈｅｎ０ｌ０ｘｉｄａｓｅ　ｉｎ　ｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｐｉｄｅｒｍｉｓ　ｍｕｃｕｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｌａｎｃｅｌｅｔ　质，在机体处于高氧化应激状态时能代偿性的升高　。　ｂｒａｎｃｈｉｏｓｔｏｍａ　ｂｅｋｈｅｒｉｔｓｉｎｇｔａｕｅｎｓｅ［Ｊ１．ＯＰＨＥＬＩＡ，２００５，２（３）：２０７—　从本试验结果可以看出，变色鱼体内ＭＤＡ的含量极　２ｌ２．　显著的高于对照组，并且变色鱼肝脏中ＧＳＨ含量的　『２１黄凯，阮栋俭，战歌，等．氧化油脂对奥尼罗非鱼生长和抗氧化性　代谢性增高以及肝脏蛋白质含量的下降均与实验室　能的影响［ＪＩ．淡水渔业，２００６，３６（６）：２１—２４．　条件下氧化损伤的生化改变相一致。早在１９７４年　［３］　Ｍｕｒａｉ　Ｔ，Ａｎｄｒｅｗｓ　Ｊ　Ｗ．Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｄｉｅｔａｒｙ　ａ—ｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ，　ｏｘｉｄｉｚｅｄ　ｍｅｎｈａｄｅｎ　ｏｉｌ　ａｎｄ　ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ　ｏｎ　ｃｈａｎｎｅｌ　ｃａｔｆｉｓｈ　ｔａｌｕｒｕｓ　Ｍｕｒａｉｔ３１等就观察到氧化鱼油可使斑点叉尾鲴的皮肤　ｐｕｎｃｔａｔｕｓ）［Ｊ］．Ｊ．Ｎｕｔｒ．，１９７４，１０４：１４１６—１４３１．　色泽变浅，即氧化油脂可以影响黑色素的代谢。但整　［４］叶元土，郭建林，萧培珍，等．养殖武昌鱼体色与鳞片黑色素细　体皮肤颜色的变浅与局部或整体皮肤黑色素的丢失　胞初步观察［Ｊ１．饲料工业，２００６（２２）．　是否是同一问题的不同表现形式目前还尚不清楚。　［５］黄冰．大菱鲆白化病白化机理研究（Ｄ】．中国海洋大学，２００６．　已知皮肤黑色素代谢的异常可能是来源于合成　功能的抑制或降解功能的亢进。在本研究中发现，变　（编辑：沈桂宇，ｇｕｉｙｕｓｈ＠１２６．ｃｏｒｎ）